HLA-DMA rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性與膠質(zhì)瘤易感性及mTOR通路與高級(jí)別膠質(zhì)瘤預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性與膠質(zhì)瘤基因環(huán)境的關(guān)系
　　目的:
　　1.歸納分析與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的環(huán)境因素。
　　2.檢測(cè)兩組受試者HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)的多態(tài)基因型分布。
　　3.研究HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。
　　4.探討HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性-環(huán)境

2、因素交互作用與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系
　　方法:
　　1.收集兩組受試者的基本信息，應(yīng)用卡方檢驗(yàn)探討與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的環(huán)境暴露因素。
　　2.應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)90例膠質(zhì)瘤病人及110例健康人HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)的多態(tài)基因型分布。
　　3.檢測(cè)兩組病人基因型的分布與HWE(哈迪-溫伯格平衡定律)的一致性。
　　4.應(yīng)用Logistic回歸分析評(píng)估HLA-DMA基因rs1063

3、478位點(diǎn)多態(tài)性與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。
　　5.通過多因素回歸分析研究HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性-環(huán)境因素交互作用與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的基本因素分析
　　我們統(tǒng)計(jì)了90例膠質(zhì)瘤病人及110例健康人受試者在年齡、性別、是否具有吸煙史、是否具有飲酒史、是否具有膠質(zhì)瘤家族史、是否具有化學(xué)毒素接觸史以及是否具有電離輻射暴露史方面的信息，并對(duì)相關(guān)信息進(jìn)行x

4、2檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)兩組病人在年齡、性別、吸煙及飲酒史方面沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05);在膠質(zhì)瘤家族史方面，病例組（10例，11.1％）明顯高于對(duì)照組（1例，0.9％），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.002);關(guān)于環(huán)境因素，與對(duì)照組相比(0.9％)，病例組有10％的病人具有化學(xué)毒素接觸史，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.003)，由于放療（4例）和職業(yè)暴露（9例），病例組共13例病人接觸了電離輻射，兩組病人遭受電離輻射的比例具有顯著性差異（病例組1

5、4.4％，對(duì)照組1.8％，p=0.001）。表明膠質(zhì)瘤家族史、化學(xué)毒素及電離輻射與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有顯著相關(guān)性。
　　2.HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)的多態(tài)基因型分布
　　我們應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)了90例膠質(zhì)瘤病人及110例健康人HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)的多態(tài)基因型分布，共檢測(cè)出三種C/T多態(tài)基因型，分別為CC、CT及TT基因型，其中病例組CC基因型40例，CT基因型38例，TT基因型12例

6、，CT+TT基因型共50例;對(duì)照組CC基因型68例，CT基因型36例，TT基因型6例，CT+TT基因型共42例。
　　3.兩組病人的基因型分布與HWE的一致性
　　應(yīng)用卡方檢驗(yàn)計(jì)算兩組病人的CC、CT以及TT等基因型分布頻率情況，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組基因型頻率分布符合HWE平衡定律(x2=0.1822，p=0.6695)，病例組基因型分布也與HWE平衡相一致(x2=0.3809，p=0.5371)，提示兩組病人的HLA-DMA基因rs

7、1063478位點(diǎn)基因型分布具有很好的群體代表性。
　　4.HLA-DMA rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系
　　通過單變量回歸分析發(fā)現(xiàn)，TT突變純合子基因型的頻率，病例組高于對(duì)照組，膠質(zhì)瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加了3.40倍(OR=3.400，95％CI=1.184-9.764)。雜合子基因型CT可能是膠質(zhì)瘤發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)因素，但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的顯著關(guān)聯(lián)(OR=1.794，95％CI=0.985-3.271)。CT

8、+TT基因型比CC基因型更有膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=2.204，95％CI=1.149-3.566)。通過多元回歸分析可以發(fā)現(xiàn)，在校正了年齡、性別、有無吸煙史、有無膠質(zhì)瘤家族史、有無化學(xué)毒素及電離輻射接觸史后，得出校正的OR，CT+TT基因型仍然增加了膠質(zhì)瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(校正OR=1.984,95％ CI=1.084-3.630)。
　　5.HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性-環(huán)境因素交互作

9、用與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系
　　9例有化學(xué)毒素接觸史的膠質(zhì)瘤病人中，有2例表現(xiàn)為純合子CC基因型，有7例表現(xiàn)為CT+TT突變基因型，通過多因素回歸分析，發(fā)現(xiàn)化學(xué)毒素雖是膠質(zhì)瘤發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)因素，但是HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性與化學(xué)毒素沒有交互作用(p=0.289，OR=3.093，95％CI=0.065-15.801);13例有電離輻射暴露史的病人中，有2例表現(xiàn)為純合子CC基因型，有11例表現(xiàn)為CT+TT突變基因型，

10、通過多因素回歸分析，發(fā)現(xiàn)HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性與電離輻射暴露具有交互作用，而且這種交互作用顯著增加了膠質(zhì)瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(p=0.033，OR=5.359，95％CI=1.13-25.797)。
　　結(jié)論:
　　1.膠質(zhì)瘤家族史、化學(xué)毒素及電離輻射與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有顯著相關(guān)性。
　　2.HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性和膠質(zhì)瘤的易感性具有顯著相關(guān)性。
　　3.HLA-DMA基因r

11、s1063478位點(diǎn)多態(tài)性與電離輻射具有交互作用，這種交互作用使膠質(zhì)瘤易感性顯著增加。
　　第二部分 mTOR信號(hào)通路及Ki-67與高級(jí)別膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的相關(guān)性研究
　　目的:
　　1.檢測(cè)p-AKT，p-mTOR，p-p7056K及Ki-67在不同級(jí)別高級(jí)別膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平。
　　2.探討mTOR信號(hào)通路相關(guān)靶蛋白對(duì)高級(jí)別膠質(zhì)瘤預(yù)后的影響。
　　3.探討Ki-67對(duì)不同級(jí)別高級(jí)別膠質(zhì)瘤預(yù)后的影響。

12、>　　方法:
　　1.根據(jù)病歷資料及隨訪記錄，記錄所有研究對(duì)象的年齡、性別、術(shù)前Kanlofsky評(píng)分、無進(jìn)展生存期和生存期。
　　2.取所有患者的腫瘤組織蠟塊，切片行p-AKT，p-mTOR，p-p70S6K，Ki-67兔疫組化染色，根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行綜合分析，判定p-AKT，p-mTOR，p-p70S6K及Ki-67的表達(dá)情況。
　　3.應(yīng)用Kaplan-Meier單因素分析法對(duì)包括p-AKT，p

13、-mTOR，p-p70S6K,Ki-67及病理級(jí)別等在內(nèi)的12個(gè)預(yù)后影響因素進(jìn)行生存分析，研究各預(yù)后影響因素對(duì)高級(jí)別膠質(zhì)瘤預(yù)后的影響。
　　4.對(duì)單因素分析中p <0. 05者進(jìn)行COX回歸多因素分析，進(jìn)一步探討相關(guān)因素對(duì)高級(jí)別膠質(zhì)瘤預(yù)后的影響。
　　結(jié)果:
　　1.在膠質(zhì)瘤Ⅲ級(jí)中，p-AKT，p-mTOR，p-p70S6K和Ki-67的免疫組化染色呈中度陽性，在膠質(zhì)瘤W級(jí)中，p-AKT,p-mTOR，p-p70S6K

14、和Ki-G7的免疫組化染色呈強(qiáng)陽性。
　　2.應(yīng)用Kaplan-Meier單因素分析法對(duì)包括p-AKT，p-mTOR，p-p70S6K,Ki-G7及病理級(jí)別等在內(nèi)的12個(gè)預(yù)后影響因素進(jìn)行生存分析，發(fā)現(xiàn)p-AKT,p-mTOR,p-p70S6K,Ki-67的表達(dá)情況與總生存率的關(guān)系具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　3.對(duì)單因素分析中p<0.05者進(jìn)行COX回歸多因素分析，患者p-AKT(low，high)及Ki-67 (l

15、ow,high)與生存期均無相關(guān)性(p>0.05);p-mTOR(low，high)及p-p70S6K(low,high)與生存期有相關(guān)性(p＜0.05 )。
　　4.p-mTOR陽性率與無進(jìn)展生存期呈負(fù)相關(guān)(r=-0.838，p<0.001)，與生存期呈負(fù)相關(guān)(r=-0.777，p <0. 001)。p-p70S6K陽性率與無進(jìn)展生存期呈負(fù)相關(guān)(r=-0.509,p <0.001)，與生存期呈負(fù)相關(guān)(r=-0. 531,P<0.

16、001).
　　5.2組p-mTOR. p-p70S6K的表達(dá)情況與無進(jìn)展生存期和生存期的關(guān)系分別制作成Kaplan-Meier生存曲線，兩者之間無進(jìn)展生存期對(duì)比有顯著性差異(p<0.05),生存期對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05).
　　結(jié)論:
　　1.mTOR信號(hào)通路中p-mTOR及p-p70S6K的表達(dá)水平與高級(jí)別膠質(zhì)瘤患者預(yù)后密切相關(guān)，p-mTOR及p-p70S6K可作為對(duì)膠質(zhì)瘤預(yù)后判斷的客觀性指標(biāo)。