C型瞬時受體電位通道TRPC在低氧高二氧化碳肺動脈平滑肌細胞增殖、凋亡中的作用.pdf

1、目的:
　　探討低氧高二氧化碳性肺動脈高壓時肺動脈平滑肌細胞增殖和凋亡與TRPC1/4/6的關(guān)系。
　　方法:
　　1.SD雄性大鼠麻醉后分離其肺動脈。膠原酶Ⅰ組織塊消化法取肺動脈平滑肌細胞，放于37℃含5％ CO2和21％O2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　2.采用平滑肌α-肌動蛋白(smooth muscleα-actin，α-SMA)免疫熒光染色法用熒光顯微鏡鑒定PASMCs。
　　3.選用傳至4～6代且生長狀

2、態(tài)良好的PASMCs，加入無血清DMEM饑餓24 h，隨機分為6組:常氧對照組(N)，低氧高二氧化碳組(H)，DMSO組(D)，TRPC1/4/6抑制劑SKF-96365組(S)，TRPC1/4激動劑CPA組(C)，TRPC6激動劑OAG組(O)。N組置于37℃常氧培養(yǎng)箱(21％O2，5％ CO2)中培養(yǎng)24 h，其余5組放于37℃三氣培養(yǎng)箱(5％O2，6％ CO2)培養(yǎng)24 h。
　　4.指標檢測:造模結(jié)束后，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈

3、式反應(RT-PCR)和蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blotting)分別檢測TRPC1，4，6 mRNA和蛋白的表達;CCK-8法檢測各組細胞增殖情況;原位末端標記法(TUNEL)檢測各組細胞凋亡指數(shù);Fura2-AM雙波長法檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度。
　　結(jié)果:
　　1.與N組相比，H組和D組PASMCs中TRPC1/4/6 mRNA和蛋白表達量明顯增高(P＜0.05)，PASMCs增殖增加（P＜0.05），凋亡減少（

4、P＜0.05），細胞內(nèi)鈣離子濃度增高(P＜0.05)。
　　2.較之H組，SKF-96365降低了TRPC1/4/6 mRNA和蛋白的表達（P＜0.05），抑制了PASMCs的增殖(P＜0.05)，并促進其凋亡（P＜0.05），降低了胞內(nèi)鈣離子濃度（P＜0.05）。
　　3.與H組相比，CPA升高了TRPC1 mRNA和蛋白的表達(P＜0.05)，促進了PSAMCs的增殖（P＜0.05），抑制了PASMCs的凋亡（P＜0.0

5、5），增加了細胞內(nèi)鈣離子濃度(P＜0.05)。但TRPC4 mRNA和蛋白的表達變化無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　4.與H組相比，OAG升高了TRPC6 mRNA和蛋白的表達（P＜0.05）;促進了PSAMCs的增殖（P＞0.05），抑制了PASMCs的凋亡(P＜0.05)，增加了細胞內(nèi)鈣離子濃度（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　低氧高二氧化碳時，PASMCs中TRPC1/4/6 mRNA和蛋白表達增加，細胞內(nèi)