Rho激酶在慢性低氧高二氧化碳性肺動脈高壓中的作用及法舒地爾干預機制的探討.pdf

1、目的：
　　 探討大鼠在慢性低氧高二氧化碳環(huán)境下,Rho激酶在慢性低氧高二氧化碳性肺動高壓形成中的作用及法舒地爾干預作用及其機制的探討。
　　 方法：
　　 將SPF級雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠24只,體重(180～210g),隨機分成3組(n=8),即正常塒照組(N組)、低氧高二氧化碳4周+生理鹽水注射組(F組)、低氧高二氧化碳四周+法舒地爾干預組(R組)。將后兩組大鼠放入常壓低氧高二氧化碳艙

2、內,充入N2使艙內氧氣濃度維持在9％～11％,二氧化碳濃度維持在5.0％～6.5％(艙內水蒸汽用無水氯化鈣吸收),每天8小時,每周6天,連續(xù)/l周。F組于每日進艙前半小時腹腔注射生理鹽水0.5ml,R組于每日進艙前半小時腹腔注射法舒地爾(15mg/kg),N組置于艙外,自由呼吸空氣,其他組飼養(yǎng)條件相同。實驗4周后,大鼠用5％水合氯醛(400mg/Kg)腹腔注射麻醉,自頸外靜脈插管測肺動脈壓(mPAP),頸總動脈插管測平均頸動脈壓(mCA

3、P)。分別稱取右心室游離壁(RV)和左心室加室間隔(LV+S)重量,以RV/(LV+S)％作為反映右心室肥大的指標。HE染色測量肺細小動脈管壁面積/管總面積(WA/TA)％,以mPAP、mCAP、RW(LV+S)％、(WA/TA)％作為判斷模型建立成功的指標。光鏡下觀察肺血管重塑情況,電鏡下觀察肺細小動脈超微結構。ELISA法測定肺勻漿中NO及NOS的含量。免疫組織化學技術檢測肺細小動脈壁Rho激酶Ⅰ(ROCKI)及內皮型一氧化氮合酶(

4、eNOS)蛋白表達。
　　 結果：
　　 各組大鼠mCAP的比較:N組、F組、R組大鼠間mCAP無明顯差異,F組的mPAP明顯高于N組,R組mPAP顯著低于F組,F組的RV/(LV+S)高于N組,R組RV/(LV+S)顯著低于F組。F組的wA/TA高于N組,R組WA/TA顯著低于F組。(2)光鏡下所見:N組肺細小動脈內彈力板自然彎曲,平滑肌層未見明顯增厚,管壁均勻一致；F組細小動脈內彈力板扭曲明顯,中膜平滑肌層明顯增厚,

5、平滑肌細胞增生,管壁增厚；R組與F組相比較,平滑肌細胞肥大增生減輕,管壁增厚明顯減少。(3)電鏡下,F組與N組比較大鼠肺細小動脈內皮細胞吞飲小泡增多,血管壁增厚,中膜平滑肌細胞增生,纖維細胞增多,膠原纖維密集,管腔明顯狹窄,板層小體空泡狀,R組與F組相比平滑肌細胞肌絲清,色深,纖維細胞少,膠原纖維減少,肺泡上皮細胞連接緊密、微絨毛豐富、結構清、板層小體染色深。(4)F組與N組比較肺勻漿中NO、NOS濃度顯著降低,R組與F組比較肺勻漿中N

6、O、NOS濃度顯著升高。(5)F組與N組比較肺細小動脈ROCKI表達增強,管壁染色明顯加深,eNOS表達減弱,管壁染色減弱。R組與F組比較ROCKI表達減弱,管壁染色變淡,eNOS表達增加,管壁染色明顯加深。
　　 結論：
　　 低氧可引起肺血管Rho激酶表達增加。Rho激酶可能通過促進肺血管平滑肌收縮以及肺血管重構的途徑參與低氧性肺動脈高壓的發(fā)生。Rho激酶抑制劑法舒地爾可能通過上調eNOS表達至內源性NO生成增多從而