線粒體途徑細(xì)胞凋亡與慢性低氧高二氧化碳肺動(dòng)脈高壓肺血管重構(gòu)的關(guān)系及葛根素的影響.pdf

1、目的：研究在低氧高二氧化碳情況下，肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞線粒體途徑凋亡與肺動(dòng)脈重構(gòu)的關(guān)系及葛根素的影響。 方法：將SPF級(jí)雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只，體重180～210g，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(N組)，慢性低O2高CO22周組(H2w組)，慢性低O2高CO24周組(H4w組)，慢性低O2高CO24周+葛根素組(H4w+G組)，每組10只。慢性低O2高CO2組置于常壓低氧高二氧化碳艙內(nèi)，充入N2使O2濃度維持在8.

2、5％～11％，CO2濃度維持在5.0％～6.5％。艙內(nèi)水蒸氣用無水CaCl2吸收，每天8h，每周6d，連續(xù)2w或4w。慢性低O2高CO24周+葛根素組，每次低O2高CO2前半小時(shí)腹腔注射葛根素(50mg/kg體重)，其它條件同H4w組。實(shí)驗(yàn)2w和4w后，大鼠腹腔麻醉，采用右心導(dǎo)管法測(cè)肺動(dòng)脈平均壓(mPAP)，頸總動(dòng)脈插管測(cè)頸動(dòng)脈平均壓(mCAP)，分別稱取右室(RV)和左室+室間隔(LV+S)的重量，以RV/(LV+S)重量比來反映右心

3、室重量的變化。光鏡下測(cè)定肺動(dòng)脈中膜厚度(PAMT)，免疫組化法(anti-α-actin)測(cè)定肺動(dòng)脈管壁α-actin含量，反映肺血管重建情況；TUNEL法計(jì)算肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡指數(shù);免疫組化法計(jì)算肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖指數(shù)(anti-PCNA)、胞漿線粒體Cyt-c釋放量，胞漿Bcl-2蛋白、Bax蛋白含量；分光光度法檢測(cè)肺組織勻漿Caspase9、Caspase3酶活性。 結(jié)果： 1、H2w組、H4w組mPAP、RV

4、/(LV+S)、PAMT顯著高于正常N組(P＜0.01)；H4w+G組mPAP、RV/(LV+S)、PAMT‘顯著低于H4w組(P＜0.01)；4組mCAP比較無顯著性差異(P＞0.05)。 2、H2w組、H4w組各級(jí)肺動(dòng)脈管壁α-actin含量顯著高于正常組(P＜0.01)，H4w組高于H2w組；H4w+G組大鼠肺彈力型動(dòng)脈α-actin含量顯著低于于H4w組相應(yīng)直徑肺動(dòng)脈(P＜0.01；H4w+G組大鼠肺肌型動(dòng)脈和肺微細(xì)動(dòng)脈

5、管壁α-actin含量與H4w組相應(yīng)直徑肺動(dòng)脈比較無顯著差異(P＞0.05)。 3、H2w組、H4w組大鼠各級(jí)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡指數(shù)較N組顯著下降(P＜0.05)；H4w+G組大鼠肺彈力型動(dòng)脈和肌型動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡指數(shù)較H4w組相應(yīng)直徑肺動(dòng)脈顯著升高(P＜0.05)；兩組間肺微細(xì)動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡指數(shù)無顯著性差異(P＞0.05)。 H2w組、H4w組大鼠各級(jí)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖指數(shù)顯著高于N組(P＜0.01)；H4w

6、+G組大鼠各級(jí)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖指數(shù)與H4w組比較無顯著差異(P＞0.05)。 4、H2w組、H4w組大鼠各級(jí)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞胞漿線粒體cyt-c釋放量顯著低于正常組(P＜0.01)；H4w+G組大鼠各級(jí)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞漿線粒體Cyt-c釋放量顯著高于H4w組(P＜0.01)，但顯著低于N組(P＜0.01)。 5、H2w組、H4w組大鼠各級(jí)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞胞漿Bcl-2含量顯著高于于N組(P＜0.01)，Bax含量顯著

7、低于N組(P＜0.01)，Bcl-2/Bax高于N組。 H4w+G組大鼠肺彈力型動(dòng)脈和肺微細(xì)動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞胞漿Bcl-2含量顯著低于H4w組(P＜0.01)，兩組間在肺肌型動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞未見顯著性差異(P＞0.05)；Bax含量在H4w+G組與H4w組間各級(jí)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞胞漿未見顯著性差異。 6、H2w組、H4w組大鼠肺組織勻漿Caspase9酶活性顯著低于N組(P＜0.01)；H4w+G組大鼠肺組織勻漿Caspase

8、9酶活性顯著高于H4w組(P＜0.01)。 H2w組、H4w組大鼠肺組織勻漿Caspase3酶活性顯著低于N組(P＜0.01)；H4w+G組大鼠肺組織勻漿Caspase3酶活性顯著高于H4w組(P＜0.01)。 結(jié)論： 1、肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞線粒體途徑細(xì)胞凋亡減少可能在低氧高二氧化碳所致肺動(dòng)脈高壓肺動(dòng)脈平滑肌層重構(gòu)中起重要作用。 2、肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞胞漿Bcl-2蛋白和Bax蛋白相對(duì)含量變化可能是導(dǎo)致該途徑