SALL4調(diào)控CD44在胃癌中的作用和機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討人婆羅雙樹樣基因4（spalt-like transcription factor4, SALL4）在胃癌生長和轉(zhuǎn)移中的作用，揭示SALL4調(diào)控CD44的作用及機(jī)制，為闡明SALL4促癌作用提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為胃癌分子診斷和治療提供新的靶點(diǎn)。
　　方法：采用慢病毒介導(dǎo)shRNA基因干擾或四環(huán)素誘導(dǎo)shRNA基因干擾人胃癌 MGC-803細(xì)胞 SALL4表達(dá)，采用實(shí)時熒光定量 PCR和Western blot檢測干

2、擾效率；生長曲線和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖能力；劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞運(yùn)動和遷移能力。采用實(shí)時熒光定量PCR和Western blot檢測SALL4基因干擾對干性相關(guān)基因表達(dá)以及信號通路活化的影響。雙熒光素酶報(bào)告基因分析SALL4對CD44啟動子活性影響；染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)（chromatin immunoprecipitation, ChIP）檢測SALL4蛋白與CD44啟動子區(qū)域結(jié)合情況。采用生長曲線、平

3、板克隆形成實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)以及裸鼠皮下荷瘤實(shí)驗(yàn)評價(jià)CD44回補(bǔ)對shRNA基因干擾SALL4胃癌細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移的影響。
　　結(jié)果：實(shí)時熒光定量PCR及Western blot結(jié)果表明shRNA直接干擾或四環(huán)素誘導(dǎo)shRNA基因干擾均可有效降低MGC-803細(xì)胞SALL4表達(dá)；SALL4基因干擾導(dǎo)致胃癌細(xì)胞增殖能力和遷移能力降低。SALL4基因減低可顯著抑制干性分子 Oct4、Sox2、Nanog、c-My

4、c和 CD44基因及蛋白表達(dá)，并且可抑制 ERK1/2、NF-κB和 STAT3信號通路活化。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測結(jié)果表明，基因干擾SALL4抑制CD44啟動子活性。ChIP實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SALL4蛋白結(jié)合CD44啟動子區(qū)-505 bp~-305 bp區(qū)域。CD44回補(bǔ)可逆轉(zhuǎn)SALL4基因干擾引起的胃癌細(xì)胞體外增殖和遷移能力抑制以及體內(nèi)腫瘤生長抑制。
　　結(jié)論：SALL4通過上調(diào)CD44促進(jìn)胃癌細(xì)胞體外增殖、遷移和體內(nèi)致瘤能力。