FHIT、P16蛋白在肝細(xì)胞肝癌組織中的表達(dá)、相關(guān)性及其臨床意義.pdf

1、背景：
　　原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)在新的癌癥診斷中占據(jù)第六位,也是全球癌癥死亡的第三個(gè)最常見(jiàn)的原因。對(duì)于肝癌目前的治療效果還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能令人滿意，其五年存活率大約只有10％。肝移植在目前被認(rèn)為是其唯一的治愈性療法，然而肝癌晚期和不能切除的肝細(xì)胞癌患者占了80％以上，而這些患者又是不適合進(jìn)行肝臟移植或手術(shù)切除的。常見(jiàn)的一些化療方案，如使用常規(guī)的具有細(xì)胞毒性的藥物，例如阿霉素，順鉑和

2、氟尿嘧啶的化療，這也是一種治療手段，特別是針對(duì)晚期腫瘤患者的臨床治療。然而因?yàn)閲?yán)重的毒性反應(yīng)和高復(fù)發(fā)率，這些治療的存活時(shí)間也僅僅只能維持在大約六個(gè)月左右。因此，研究探索 HCC新的檢測(cè)或者治療手段就顯得尤為必要和迫切。
　　對(duì)于腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的生物活動(dòng)一直是諸多學(xué)者研究的熱點(diǎn)，腫瘤抑制基因和癌基因的活動(dòng)也已經(jīng)證實(shí)在腫瘤發(fā)生中的啟動(dòng)作用，還有不少分子集團(tuán)、分子通路以及轉(zhuǎn)錄蛋白也起到十分重要的作用。脆性組氨酸三聯(lián)體(fragile

3、 histidine triad, FHIT)是1996年Ohta[1]等研究人員提出的一個(gè)新抑癌基因，該基因存在于絕大多數(shù)的正常器官組織中，跨越位點(diǎn)FRA3B，位于染色體的3q14.2區(qū)域，其高度同源于組氨酸三聯(lián)體蛋白，因此被定義為FHIT，其通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，阻滯細(xì)胞的生長(zhǎng)周期來(lái)發(fā)揮抑制腫瘤增殖的作用。但在人類的多種惡性腫瘤中(膀胱癌、胃癌、肺癌、食管癌、結(jié)腸癌等）呈現(xiàn)出雜合缺失，轉(zhuǎn)錄差錯(cuò)，從而引起FHIT蛋白的表達(dá)降低甚至缺失，最

4、終導(dǎo)致其抑癌作用降低甚至喪失。另外近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種多腫瘤抑制的基因(multiple tumor suppressor，MTS1)，即為P16基因，由P16基因所表達(dá)的大約16KD的蛋白質(zhì)分子被命名為P16蛋白，CDK(cyclin-dependentkinase，CDK)的活性功能是細(xì)胞進(jìn)入生長(zhǎng)周期的前提條件，而細(xì)胞周期蛋白(cyclin)一定要和CDK發(fā)生結(jié)合，而結(jié)合所形成的cyclin復(fù)合體才可以活化，Rb基因的表達(dá)產(chǎn)物P110

5、Rb蛋白磷酸化依賴于cyclin復(fù)合體，活化后的Rb蛋白能夠使得細(xì)胞進(jìn)入G1-S期的生長(zhǎng)周期，而在此過(guò)程中P16蛋白作為始動(dòng)因素，其作用是抑制CDK的生物活性[2-4]。一旦P16基因因缺失、甲基化或者發(fā)生基因突變而不能表達(dá)P16蛋白時(shí)，細(xì)胞內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合CDK4的能力就會(huì)下降，對(duì)于細(xì)胞有絲分裂活動(dòng)就不能進(jìn)行有效地阻斷，這樣會(huì)導(dǎo)致CDK4和細(xì)胞周期蛋白的結(jié)合增多，從而使得有絲分裂活動(dòng)在細(xì)胞內(nèi)變得活躍，最終演變?yōu)榧?xì)胞的生長(zhǎng)活動(dòng)失去控制。有報(bào)

6、道提出惡性腫瘤的組織學(xué)分級(jí)可能與P16基因的表達(dá)不存在明顯的因果關(guān)系，而與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)，由此可能提示P16蛋白可能是預(yù)測(cè)肝癌患者預(yù)后的一項(xiàng)重要指標(biāo)[5]。因此FHIT、P16蛋白作為肝癌發(fā)生過(guò)程中的一個(gè)靶點(diǎn)，對(duì)其診斷，治療及預(yù)后都有重要價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化技術(shù)對(duì)74例肝癌標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，目的在于了解FHIT和P16蛋白在肝癌組織中的表達(dá)情況，結(jié)合臨床檢查指標(biāo)，探討這兩個(gè)指標(biāo)在肝癌發(fā)生中的作用及其相關(guān)性，闡述FHIT

7、、P16在HCC臨床診斷和發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的價(jià)值。
　　目的：
　　研究FHIT和P16兩種因子在肝癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的意義及二者間所存在的相關(guān)性，為肝癌臨床藥物治療提供新的理論基礎(chǔ)，也為患者早期個(gè)體化治療、靶向治療提供新的思路和方法。
　　方法：
　　收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2009年5月至2011年7月的74例進(jìn)行手術(shù)治療的肝癌患者病理標(biāo)本、臨床資料。其中女性患者23例，年齡29-77歲，平均年齡50.43±3.

8、24歲；男性患者51例，年齡26-73歲，平均年齡47.18±2.36歲。對(duì)于我們所收集病例的選擇條件為：1.均未在手術(shù)前進(jìn)行其他任何形式的放、化療治療；2.對(duì)于所有肝癌患者的病理學(xué)診斷結(jié)果均有兩位病理科副高級(jí)職稱醫(yī)務(wù)人員共同證實(shí)；3臨床資料較為完備。我們采用 SP（ streptavidin peroxdase conjugated method）法檢測(cè)遠(yuǎn)癌組織、癌旁組織和肝癌組織中FHIT和P16蛋白的表達(dá)，采用Biosens Di

9、gital Imaging System v1.6分析圖像系統(tǒng)定量分析所得結(jié)果，用平均灰度值（average density）表示免疫組化結(jié)果的染色強(qiáng)度。統(tǒng)計(jì)分析FHIT、P16蛋白與所收集臨床指標(biāo)及此二者表達(dá)的相關(guān)性和意義。
　　結(jié)果：
　　1.FHIT在組織中的表達(dá)：三組組織中FHIT的表達(dá)依次降低，遠(yuǎn)癌組呈強(qiáng)陽(yáng)性，癌旁組織和癌組織的表達(dá)均有缺失存在，且遠(yuǎn)癌肝組織組>癌旁組>肝癌組，兩兩比較后，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0

10、.01)。
　　2.P16在組織中的表達(dá)：P16在三組組織中表達(dá)依次降低，遠(yuǎn)癌組呈強(qiáng)陽(yáng)性，癌旁組織和癌組織的表達(dá)均有缺失存在，且遠(yuǎn)癌肝組織組>癌旁組>肝癌組，兩兩比較后，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　3.FHIT和P16在三組組織中的相關(guān)性表達(dá)分別為：（1）癌組織中rs=0.572、P=0.004；（2）癌旁組織中rs=0.495、P=0.007；（3）遠(yuǎn)癌組織中 rs=0.309、P=0.017。三組的相關(guān)性分

11、析中 P值均<0.05，rs也均為正數(shù)，因此在三組中 FHIT和 P16的表達(dá)均存在相關(guān)性,且呈低到中度正相關(guān)。
　　4. FHIT的表達(dá)與年齡、性別和肝癌大小無(wú)關(guān)，與肝癌的TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及門靜脈癌栓是否形成有關(guān)；P16的表達(dá)與性別、年齡、TNM
　　分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、和門靜脈癌栓是否形成無(wú)關(guān)，與肝癌的大小、分化程度有關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.FHIT與P16基因作為新的抑癌基因在肝癌的