適配子聯(lián)合分析對肝癌診斷價(jià)值的研究.pdf

1、背景與目的：
　　原發(fā)性肝癌早期臨床癥狀常不明顯，一旦出現(xiàn)癥狀，一般為進(jìn)展期肝癌，已失去最佳治療時(shí)機(jī)，故肝癌的早期診斷非常重要。目前臨床上診斷肝癌基本依靠血清標(biāo)志物AFP及影像學(xué)檢查，但小肝癌不理想。適配子是人工合成的單鏈寡核苷酸，功能與抗體類似，但比抗體具有更多的優(yōu)勢，具有與靶目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行高親和力、高特異性的結(jié)合的特點(diǎn)，用于疾病特別是腫瘤的診斷有良好的應(yīng)用前景。本課題組在前期研究中通過SELEX技術(shù)成功篩選出一批肝癌血清適配子，

2、建立了基于三重?zé)晒夥治龅母伟┻m配子診斷應(yīng)用技術(shù)，并發(fā)現(xiàn)適配子在不同實(shí)驗(yàn)條件下對肝癌的診斷效率有所不同。本研究將在前期工作基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究適配子聯(lián)合分析在肝癌診斷中的價(jià)值，為建立基于適配子的肝癌診斷技術(shù)奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1．血清標(biāo)本及其相關(guān)臨床資料收集：收集就診于南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院2014-2015年的原發(fā)性肝癌和肝硬化患者的血清標(biāo)本各104例，-80 ℃保存?zhèn)溆?，同時(shí)收集相關(guān)的臨床資料，主要包括年齡、性別、血清腫

3、瘤標(biāo)志物、肝功能、凝血功能、影像學(xué)檢查、病理資料等。
　　2．適配子與血清標(biāo)本作用前后的熒光值測定：人工合成肝癌血清適配子AP-HCS-11-6、AP-HCS-9-89。使用real-timePCR儀測定三重血清熒光值，即血清自體熒光值、加入EvaGreen染料后的熒光值和加入適配子后的熒光值。以血清3μL、2×EvaGreen核酸染料2.5或5μL、適配子0.3、0.5或0.7pmol為基本元素組合6種不同的實(shí)驗(yàn)條件，分別在8℃

4、、18℃、28℃、37℃、47℃、55℃檢測肝癌、肝硬化血清標(biāo)本的熒光值。
　　3．熒光值對肝癌的診斷價(jià)值評(píng)價(jià)：以熒光檢測結(jié)果為測試變量進(jìn)行ROC曲線分析，以AUROC評(píng)價(jià)診斷價(jià)值大小，并根據(jù)ROC曲線分析結(jié)果確定最佳界值，計(jì)算熒光值對肝癌的診斷效率，包括敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測值和陽性預(yù)測值、陰性似然比和陽性似然比。單個(gè)熒光指標(biāo)直接進(jìn)行ROC曲線分析評(píng)價(jià)其診斷價(jià)值。多個(gè)熒光指標(biāo)聯(lián)合通過二元Logistic回歸建模并獲取模

5、型對標(biāo)本的類別概率預(yù)測值，再以后者為測試變量進(jìn)行ROC曲線分析，評(píng)價(jià)其診斷價(jià)值。
　　4．聯(lián)合分析對肝癌的診斷價(jià)值評(píng)價(jià)：按上述診斷價(jià)值評(píng)價(jià)方法，評(píng)價(jià)單個(gè)適配子不同條件或溫度下熒光檢測結(jié)果聯(lián)合分析對肝癌的診斷價(jià)值（包括各溫度下單條件、各溫度下雙條件、各溫度下三條件、各條件下雙溫度、各條件下三溫度的檢測結(jié)果聯(lián)合分析）、兩個(gè)適配子的熒光檢測結(jié)果聯(lián)合分析對肝癌的診斷價(jià)值（包括各溫度下單條件、各溫度下雙條件、各條件下雙溫度的檢測結(jié)果聯(lián)合分析

6、）、適配子與AFP聯(lián)合分析對肝癌的診斷價(jià)值。
　　結(jié)果：
　　1．單個(gè)適配子聯(lián)合分析對肝癌的診斷價(jià)值：適配子AP-HCS-11-6和AP-HCS-9-89在不同溫度或?qū)嶒?yàn)條件下的熒光檢測結(jié)果對肝癌的診斷價(jià)值存在差異，單個(gè)熒光指標(biāo)診斷肝癌的最大AUROC為0.721，聯(lián)合分析明顯優(yōu)于單個(gè)指標(biāo)，各溫度下雙條件、各溫度下三條件、各條件下雙溫度、各條件下三溫度的檢測結(jié)果聯(lián)合分析診斷肝癌的最大AUROC均在0.9以上。
　　2．

7、兩個(gè)適配子聯(lián)合分析對肝癌的診斷價(jià)值：兩個(gè)適配子的熒光檢測結(jié)果聯(lián)合分析對肝癌的診斷價(jià)值明顯優(yōu)于單個(gè)適配子，各溫度下雙條件、各條件下雙溫度的檢測結(jié)果聯(lián)合分析，其診斷肝癌的最大AUROC均在0.9以上。
　　3．適配子與AFP聯(lián)合分析對肝癌的診斷價(jià)值：相同條件下雙溫度檢測結(jié)果聯(lián)合AFP診斷肝癌的AUROC、特異度、敏感度、準(zhǔn)確度均可達(dá)到0.9以上，較其他聯(lián)合方式對肝癌的診斷效果更好。
　　結(jié)論：
　　1、肝癌血清適配子在不同