云斑尖塘鱧、線(xiàn)紋尖塘鱧及其雜交子一代的分子遺傳研究.pdf

1、本文以云斑尖塘鱧、線(xiàn)紋尖塘鱧及其雜交F1為研究對(duì)象，應(yīng)用隨機(jī)擴(kuò)增DNA多態(tài)性(RAPD)及微衛(wèi)星(SSR)分子標(biāo)記技術(shù)分析了云斑尖塘鱧、線(xiàn)紋尖塘鱧及其雜交F1的遺傳關(guān)系。主要的研究結(jié)果如下：
　　 1.云斑尖塘鱧、線(xiàn)紋尖塘鱧及其正反雜交F1間遺傳關(guān)系的RAPD分析
　　 應(yīng)用RAPD技術(shù)研究云斑尖塘鱧、線(xiàn)紋尖塘鱧及其雜交子一代(F1)間的遺傳關(guān)系。篩選得到25個(gè)隨機(jī)引物均在親本和雜交F1間呈現(xiàn)多態(tài)，遺傳相似性指數(shù)和遺傳距

2、離的計(jì)算結(jié)果顯示，正交F1(云斑尖塘鱧♂×線(xiàn)紋尖塘鱧♀)與母本平均遺傳相似系數(shù)(0.7090)高于與父本平均遺傳相似系數(shù)(0.5948)；反交F1(云斑尖塘鱧♀×線(xiàn)紋尖塘鱧♂)與母本平均遺傳相似系數(shù)(0.6301)也高于與父本平均遺傳相似系數(shù)(0.6089)。說(shuō)明正反交子代在遺傳關(guān)系上均偏向各自的母本，對(duì)擴(kuò)增帶和聚類(lèi)圖的分析均得到這一結(jié)果，表明F1所接受的雙親遺傳物質(zhì)并非完全對(duì)等的，所獲得的遺傳信息可能更多來(lái)自母本。
　　 2.

3、云斑尖塘鱧DNA文庫(kù)構(gòu)建與SSR位點(diǎn)篩選
　　 采用PCR法快速篩選云斑尖塘鱧基因組文庫(kù)，以獲得(CA/CT)n微衛(wèi)星位點(diǎn)。云斑尖塘鱧基因組DNA經(jīng)限制性?xún)?nèi)切酶HaeIII+Dra I雙酶切后，連接pMD18-T載體克隆，構(gòu)建基因組文庫(kù)。以通用引物M13+/-與重復(fù)序列引物(CA)15、(CT)15對(duì)基因組文庫(kù)進(jìn)行篩選，二次篩選后得到142個(gè)可能含有微衛(wèi)星位點(diǎn)的陽(yáng)性克隆。除4個(gè)陽(yáng)性克隆信號(hào)弱無(wú)法測(cè)序外，得到138個(gè)序列中，經(jīng)查找

4、有98個(gè)克隆共得到147個(gè)微衛(wèi)星序列，其中完美型有92個(gè)，占63％，非完美型16個(gè)，占10％，復(fù)合型39個(gè)，占27％。在所得微衛(wèi)星序列中，重復(fù)單元除(CA/CT)n外，還觀(guān)察到單堿基、三堿基、四堿基、五堿基、六堿基重復(fù)單元。根據(jù)側(cè)翼序列設(shè)計(jì)54對(duì)引物，通過(guò)優(yōu)化PCR反應(yīng)條件，可獲得清晰可重復(fù)的目的條帶，視為適用引物。
　　 3.云斑尖塘鱧、線(xiàn)紋尖塘鱧及其正反雜交F1的微衛(wèi)星分析
　　 采用13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)云斑尖塘鱧、線(xiàn)

5、紋尖塘鱧及其正反雜交F14個(gè)群體(M、L、ML、LM)的等位基因頻率、群體分化系數(shù)、雜合度、Shannon信息指數(shù)、每個(gè)位點(diǎn)和每個(gè)樣品的固定指數(shù)、哈代-溫伯格平衡狀態(tài)概率值及4群體間遺傳相似系數(shù)、遺傳距離等進(jìn)行了遺傳檢測(cè)?？偣矙z測(cè)到51個(gè)等位基因，平均每個(gè)基因座位3.92個(gè)等位基因，各微衛(wèi)星座位等位基因數(shù)為5.19個(gè)不等。M、ML、LM、L四個(gè)群體平均期望雜合度(He)依次為0.63、0.69、0.74、0.59；平均觀(guān)測(cè)雜合度(Ho)

6、依次為0.42、0.68、0.72、0.34；平均Shannon信息指數(shù)(I)依次為1.16、1.25、1.30、1.09，說(shuō)明雜交明顯改變了F1的遺傳結(jié)構(gòu)，增加了基因雜合性和遺傳多樣性。對(duì)FIS值觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，雜合子缺失狀態(tài)位點(diǎn)(24)小于雜合子過(guò)剩狀態(tài)位點(diǎn)(27)，且通過(guò)計(jì)算基因型P值，確定了對(duì)哈代-溫伯格平衡(HWE)的偏離情況。整個(gè)雜交體系分化系數(shù)(FST)平均值為0.226，說(shuō)明在總遺傳變異中有22.6％來(lái)自群體之間，77.4％來(lái)