LncRNA-HIT在腫瘤中的表達(dá)及臨床意義的研究.pdf

1、長鏈非編碼RNA(lncRNA）是長度超過200nt，沒有開放閱讀區(qū)、缺乏蛋白編碼能力的一類轉(zhuǎn)錄物。LncRNAs在細(xì)胞生物過程中發(fā)揮廣泛的作用，如細(xì)胞生長、生存、遷移、侵襲和分化等。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多因素多步驟的演變過程，上皮細(xì)胞間質(zhì)化(MET)是其中一個(gè)重要過程，大量研究表明lncRNAs在其中發(fā)揮了重要作用。
　　目的:
　　本次實(shí)驗(yàn)旨在篩選與MET相關(guān)的一種新長鏈非編碼RNA并研究其在相關(guān)腫瘤中的表達(dá)及其臨床意義。

2、
　　方法:
　　(1)采用昂飛人全基因組表達(dá)譜芯片檢測(cè)經(jīng)空載體或TGFβ處理大鼠乳腺上皮細(xì)胞系（NmuMG細(xì)胞系）后lncRNAs的表達(dá)情況。
　　(2)通過基因芯片信號(hào)的分析和基因位點(diǎn)分析確定LncRNA-HIT(AK020562)為研究對(duì)象。
　　(3)RT-qPCR驗(yàn)證lncRNA-HIT在TGFβ誘導(dǎo)的NMuMG細(xì)胞中的表達(dá)。
　　(4)利用BLAST分析軟件評(píng)估lncRNA-HIT在人體中的保守

3、性，及種間同源基因定位于同一區(qū)域的可能性。
　　(5)利用組織芯片(TMA)和鎖核苷酸原位雜交(LNA-ISH)的實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)lncRNA-HIT在89例乳腺癌組織（15例侵襲性，74例非侵襲性）和4例正常組織及9例異型增生乳腺組織中的表達(dá)。
　　(6)利用組織芯片(TMA)和鎖核苷酸原位雜交(LNA-ISH)的實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)lncRNA-HIT在392例肺癌組織中的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)在NmuMG中TG

4、Fβ誘導(dǎo)EMT后，633個(gè)lncRNAs表達(dá)下調(diào)，680個(gè)lncRNAs表達(dá)上調(diào)。在表達(dá)上調(diào)的lncRNAs中，AK020562定位于HOXA基因簇中，并且被TGFβ顯著地誘導(dǎo)，因此我們將其列為研究對(duì)象，并命名為lncRNA-HIT(HOXAtranscript induced by TGFβ)
　　(2)人類lncRNA-HIT與大鼠lncRNA-HIT具有很好的保守性
　　(3) lncRNA-HIT的表達(dá)在人類乳腺正常

5、組織、異性增生組織、非侵襲性乳腺組織、侵襲性乳腺癌組織中的表達(dá)不斷上升。
　　(4) lncRNA-HIT的表達(dá)與肺癌的病理類型相關(guān)
　　(5) lncRNA-HIT與早期（Ⅰ-Ⅱ期）肺癌患者的復(fù)發(fā)相關(guān)，晚期(Ⅲ-Ⅳ)期肺癌患者的復(fù)發(fā)無關(guān)，P均＜0.05。
　　(6) lncRNA-HIT與早期肺腺癌的無病生存期和總生存期相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　lncRNA-HIT在TGFβ處理NmuMG細(xì)系所誘導(dǎo)的MET

6、中過表達(dá)，在人類乳腺正常組織、異性增生組織、非侵襲性乳腺組織、侵襲性乳腺癌組織中的表達(dá)不斷上升，說明lncRNA-HIT在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著一定作用。lncRNA-HIT的表達(dá)與早期肺癌、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的肺腺癌的復(fù)發(fā)和早期肺腺癌的預(yù)后相關(guān)，說明lncRNA-HIT可能與早期肺癌的耐藥性及發(fā)生發(fā)展相關(guān)?？傊?，lncRNA-HIT作為新發(fā)現(xiàn)的一種長鏈非編碼RNA，具有腫瘤治療靶點(diǎn)和早期診斷分子標(biāo)記物的潛力，其在腫瘤中的作用及作用機(jī)制還