HMGCS2參與安體舒通(SPR)保護糖尿病腎臟病變的分子機制研究.pdf

1、第一部分安體舒通（SPR）對糖尿病腎臟病變(DKD)保護作用的分子靶點篩查及驗證
　　目的:探討安體舒通保護糖尿病腎臟病變的新分子靶點。
　　方法:將正常對照組db/m小鼠（db/m+ns組，n=6），糖尿病對照組db/db小鼠（db/db+ns組，n=6），安體舒通干預組db/db小鼠（db/db+SPR組，n=6）灌胃干預12周。利用透射電鏡觀察腎臟組織的超微結構,用免疫組化技術來檢測db/db2型糖尿病小鼠腎臟組織E-

2、cadherin的表達。用mRNA微陣列基因芯片分析小鼠腎臟組織表達譜并篩選出共同差異表達基因HMGCS2，用實時定量PCR及Westernblot、免疫組化檢測小鼠腎臟組織中HMGCS2及相關因子mRNA和蛋白表達。鏈脲佐菌素（STZ）誘導的1型糖尿病大鼠(T1DM組，n=3)在糖尿病病程12周后，分離對照組大鼠（NC組，n=3）和 T1DM組的腎小球和腎小管,應用 Westernblot檢測HMGCS2的表達。應用免疫組化檢測正常人

3、的腎臟（來源于既往器官捐獻）及糖尿病人的腎臟組織切片中HMGCS2的表達。
　　結果:1.電鏡提示糖尿病小鼠與非糖尿病對照組小鼠相比,腎小管上皮細胞線粒體腫脹明顯、數量減少，而安體舒通有效改善上述情況。db/db+SPR組E-cadherin表達較db/db+ns組明顯升高（P<0.05）。2.應用mRNA微陣列篩選出基因HMGCS2；與非糖尿病小鼠腎臟組織相比，糖尿病病程18周的小鼠腎臟組織中HMGCS的mRNA及蛋白表達顯著升

4、高，而經治療后HMGCS2在db/db+SPR組中表達較db/db+ns組顯著下調（P＜0.05）。分離的腎小管中 HMGCS2蛋白表達顯著高于分離的腎小球，且 STZ誘導的1型糖尿病大鼠的腎小管HMGCS2蛋白表達較對照組大鼠增高。糖尿病人腎小管的HMGCS2表達顯著高于正常人的表達（P＜0.05＝。
　　結論：HMGCS2在小鼠、大鼠及人的糖尿病腎臟組織中高表達，而且主要表達于腎小管中，安體舒通治療可下降其表達并改善糖尿病腎病

5、的腎小管病變，進而減少腎小管上皮細胞的炎癥纖維化和EMT。
　　第二部分 HMGCS2介導糖尿病腎病近端腎小管損傷的分子機制
　　目的：探討HMGCS2介導糖尿病腎病近端腎小管損傷的分子機制
　　方法：培養(yǎng)人的腎小管上皮細胞HK-2并根據不同實驗目的進行分組和干預。高糖及SPR干預組分為：正常葡萄糖（5.6mmol/L）、高濃度葡萄糖（25mmol/L）、SPR干預組（25mmol/L葡萄糖+0.1uM SPR）、高滲

6、對照（5.6mmol/L葡萄糖+19.4mmol/L甘露醇）、溶劑對照（25mmol/L葡萄糖+0.001uM酒精）培養(yǎng)72h;高脂干預組分為：正常葡萄糖（5.6mmol/L）、0.5％BSA對照、125μmol/L棕櫚酸、250μmol/L棕櫚酸及500μmol/L棕櫚酸培養(yǎng)24小時;醛固酮干預組分為：正常葡萄糖（5.6mmol/L）、不同濃度的醛固酮（0.001μM，0.01μM，0.1μM）及SPR干預（0.1uM醛固酮+0.1u

7、M SPR）培養(yǎng)48小時；用酮體主要成分β羥基丁酸（β-HB）干預HK-2分為：正常葡萄糖（5.6mmol/L）、酮體（正常葡萄糖+0.1uMβ-HB）培養(yǎng)72h。用實時定量熒光PCR及Western免疫印跡方法檢測腎小管上皮細胞中Hmgcs2及相關因子mRNA或蛋白表達。
　　結果：1.高糖誘導HK-2的腎小管上皮細胞 Hmgcs2表達上調,并使轉分化標志物鈣粘蛋白E表達下調，轉分化增加（P＜0.01）;而SPR干預后，Hmgc

8、s2表達下調及轉分化標志物鈣粘蛋白E表達上調,轉分化降低（P＜0.01）。2.高脂誘導腎小管上皮細胞 HMGCS2 mRNA表達增加（P＜0.05）。3.0.1μM醛固酮誘導HMGCS2的mRNA和蛋白表達，SPR干預后HMGCS2表達下調（P＜0.05）。4.β-HB可誘導HK-2細胞中MCP-1、TNF-a的表達并使E-cadherin表達下調(p＜0.05）。
　　結論:高糖及醛固酮能誘導腎小管上皮細胞高表達 HMGCS2從