脯氨酸羥化酶2參與糖尿病視網(wǎng)膜病變的機制研究.pdf

1、目的：
　　觀察脯氨酸羥化酶2(prolyl hydroxylase domain2，PHD2)在糖尿病視網(wǎng)膜病變動物模型中的表達情況，探討PHD2在糖尿病視網(wǎng)病變中的可能作用機制，揭示糖尿病視網(wǎng)膜病變治療的新靶點。
　　方法：
　　（1）早期糖尿病動物模型的制作：采用0.001mmol/L檸檬酸鹽緩沖液配成10g/L的鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)，實驗組大鼠45只，對照15只，按60 mg/kg

2、劑量左下腹腔內(nèi)注射，72h后取大鼠尾血測血糖。將血糖≥16.7mmol/L的大鼠確定為糖尿病大鼠的模型，對照組腹腔注射檸檬酸鹽緩沖液。
　　（2）建模成功的糖尿病大鼠定期檢測血糖和測量體重，并記錄。建立模型2個月后對眼部標本進行病理切片，行蘇木精-伊紅染色(hematoxylin-eosin staining,HE)及免疫熒光化學染色，觀察大鼠視網(wǎng)膜組織的病理改變及PHD2、膠質纖維酸性蛋白(glial fibrillary ac

3、idic protein,GFAP)及血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等因子在視網(wǎng)膜組織中的分布與表達情況，觀察PHD2主要表達于何種視網(wǎng)膜組織細胞，分析PHD2與其他血管增生因子的相關關系。
　　（3）早期糖尿病大鼠眼內(nèi)因子mRNA表達檢測:應用RT-PCR方法檢測PHD2、VEGF、GFAP等因子mRNA在眼內(nèi)的表達情況。
　　結果
　?。?）糖尿病

4、大鼠的體重隨時間推移先增后減，血糖始終維持在高水平，與對照組比較，有統(tǒng)計學意義（p<0.01）
　　（2）視網(wǎng)膜組織病理學檢查 HE染色結果：光鏡下正常對照組大鼠可見視網(wǎng)膜組織表面光滑，各層結構清晰完整，細胞排列整齊。與對照組相比，糖尿病大鼠組視網(wǎng)膜各層開始變薄，排列紊亂，部分血管呈擴張趨勢，并可見色素上皮細胞增生。
　?。?）免疫熒光染色：在正常大鼠視網(wǎng)膜中，PHD2不表達，GFAP及VEGF主要在星形膠質細胞中表達，其余

5、各層組織不表達；但在早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜全層中可見 PHD2、GFAP及VEGF染色均為強陽性，以神經(jīng)膠質細胞表達為主，PHD2與VEGF和GFAP共表達。
　?。?）實驗組PHD2、GFAP及VEGF mRNA表達水平較正常對照組明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.01）。
　　結論：
　　早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中PHD2高表達可能由局部高濃度血糖誘導神經(jīng)膠質細胞分泌產(chǎn)生，進而促進VEGF、GFAP的表達增高，PHD2