金黃色葡萄球菌血漿凝固酶抗血清制備及ELISA檢測(cè).pdf

1、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）在微生物分類(lèi)學(xué)上屬于葡萄球菌屬，是革蘭氏陽(yáng)性菌的代表，也是人類(lèi)的一種重要病原微生物。金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)是藥品、保健品、化妝品、食品的重要檢驗(yàn)項(xiàng)目。金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)，分為法定檢驗(yàn)和快速篩選。法定檢驗(yàn)常用標(biāo)準(zhǔn)都需以兔血漿進(jìn)行血漿凝固酶試驗(yàn)確證結(jié)果，由于兔血漿質(zhì)量穩(wěn)定性和可控性較差，檢驗(yàn)人員的視覺(jué)誤差，血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)常會(huì)發(fā)生假陰性和假陽(yáng)性;開(kāi)發(fā)ELISA檢測(cè)方法能提高血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)

2、的靈敏度和特異性，ELISA檢測(cè)方法也可直接用于金黃色葡萄球菌快速篩選。
　　論文研究以滅活的金黃色葡萄球菌為抗原免疫新西蘭大白兔，獲得了效價(jià)為1∶4000的血漿凝固酶兔抗血清;同時(shí)免疫豚鼠，獲得了效價(jià)為1∶2000的血漿凝固酶豚鼠抗血清。以?xún)煞N抗血清建立雙抗體夾心ELISA方法，優(yōu)化后ELISA實(shí)驗(yàn)條件為:豚鼠抗血清作為包被抗體，兔抗血清作為檢測(cè)抗體，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔抗體作為酶標(biāo)抗抗體，兔抗血清按1∶2000稀釋?zhuān)嗍?/p>

3、抗血清按1∶1000稀釋?zhuān)笜?biāo)記的羊抗兔抗體按1∶5000稀釋。ELISA檢測(cè)方法的評(píng)價(jià)結(jié)果是:枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、志賀氏菌、沙門(mén)氏菌、白色念珠菌、黑曲霉用ELISA法檢測(cè)，均無(wú)顯著交叉反應(yīng)，特異性良好;ELISA檢測(cè)多個(gè)樣品組內(nèi)變異系數(shù)在7.4％～12.4％，組間變異系數(shù)在8.5％～14.2％，變異程度較小，重復(fù)性好;ELISA法用于血漿凝固酶檢測(cè)靈敏度高于兔血漿凝固法;ELISA法用于金黃色葡萄球菌快速檢測(cè)靈敏度