海南百歲老人中線粒體基因突變與女性長壽關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、目的:研究指出在長壽老人中普遍保持能量代謝功能，提示線粒體是細(xì)胞/組織產(chǎn)生能量的重要器官，并且在人類長壽中有重要作用。有研究指出線粒體基因突變通過降低電子傳遞鏈的功能，減少自由基的生成，產(chǎn)生有益于長壽表型的作用。本研究以線粒體基因組為主要研究對(duì)象，使用第二代高通量測序技術(shù)(NGS)對(duì)17個(gè)來自海南萬寧縣的百歲老人的線粒體基因組進(jìn)行測序，分析mtDNA突變與個(gè)體壽命之間的關(guān)系，為進(jìn)一步探討長壽基因與信號(hào)傳導(dǎo)通路變化提供依據(jù)。
　　方

2、法:本研究中，我們通過評(píng)估長壽組和年輕組的線粒體DNA測序結(jié)果，對(duì)比兩組總SNP頻率，個(gè)體SNP頻率，SNPs產(chǎn)生效應(yīng)，在特定mtDNA區(qū)域SNP累積。將變異結(jié)果用Burrows-Wheeler Aligner(BWA)比對(duì)到線粒體基因組上;用GATK軟件對(duì)SNP和InDel進(jìn)行變異檢測，用ANNOVAR軟件同時(shí)關(guān)聯(lián)多個(gè)數(shù)據(jù)庫（如dbSNP，1000g，ESP6500等）對(duì)變異結(jié)果進(jìn)行注釋。
　　結(jié)果:1:選取海南地區(qū)，年齡在10

3、0歲以上（100±2歲）的女性老人17人。17例百歲老人中文盲17例(100.0％)，農(nóng)林牧漁勞動(dòng)者13例(76.5％)，婚姻狀況喪偶15例(88.2％)，吸煙17例（100.0％，其中1例已戒煙），飲酒0例，飲茶5例(29.4％)，大便1次/1～2d17例(100.0％);有親屬年齡＞85歲2例(11.7％)，親屬年齡無＞85歲11例(64.7％)，無法考證4例(23.5％);無重要疾病（心肺腦（老年癡呆））17例(100％);老年性

4、耳聾0例(0％)。
　　2:所有mtDNA測序數(shù)據(jù)和rCRS對(duì)比。線粒體總長16596bp，在794個(gè)位點(diǎn)上總共發(fā)生355個(gè)不同的單堿基突變SNV。檢測到的突變類型大多數(shù)是轉(zhuǎn)換（93.1％的實(shí)驗(yàn)組和81.7％的對(duì)照組），而顛換、插入和缺失相對(duì)較少。
　　3:調(diào)查SNP分布顯示不同。
　　4:在實(shí)驗(yàn)組內(nèi)發(fā)現(xiàn)11個(gè)突變位點(diǎn)，所有的實(shí)驗(yàn)樣本在這些位點(diǎn)上都發(fā)生突變;
　　5:在實(shí)驗(yàn)組內(nèi)發(fā)現(xiàn)9個(gè)突變基因，所有的實(shí)驗(yàn)樣本在這

5、些基因上都發(fā)生突變;
　　6:D-loop突變型在實(shí)驗(yàn)組內(nèi)的頻率顯著高于對(duì)照組(P=0.021);移碼突變?cè)趯?duì)照組內(nèi)的頻率顯著高于實(shí)驗(yàn)組(P=0.0000);
　　7:線粒體完整性未發(fā)現(xiàn)異常;
　　8:發(fā)現(xiàn)了3個(gè)mtSNPs(m.310T＞C或T＞TC，m.3105AC＞A，m.4048G＞A)與長壽關(guān)聯(lián)，其中非同義突變m.4048G＞A(Asp248Asn)在功能上可能起重要的保護(hù)作用。
　　9:發(fā)現(xiàn)4個(gè)基因或