SP-C基因突變與新生兒呼吸窘迫綜合征的關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、目的:
　　通過分析SP-C基因exonⅠ、Ⅱ、Ⅲ結(jié)構(gòu)，篩查SP-C基因突變類型，計算突變的基因型頻率和基因頻率，評估突變與NRDS發(fā)病及其嚴重性的關(guān)系，最終探明SP-C基因突變是否為漢族NRDS的發(fā)病因素，為國內(nèi)臨床診治該病拓寬視野。
　　方法:
　　選取2013年01月至2014年12月在北京軍區(qū)總醫(yī)院附屬八一兒童醫(yī)院新生兒重癥監(jiān)護病房住院治療、并確診為NRDS的90例漢族患兒作為NRDS組，又根據(jù)胎齡分為3個亞組

2、:極早產(chǎn)組（胎齡＜32周）、早產(chǎn)組（32周≤胎齡＜37周）、足月組（胎齡≥37周），每組30例。采用觀察表收集臨床資料，主要包括性別、胎齡、出生體重、分娩方式、窒息、胎膜早破、胎盤異常、孕母情況、血常規(guī)、血氣分析、血培養(yǎng)、痰培養(yǎng)、胸片分度、機械通氣、肺表面活性物質(zhì)使用、預后等指標。另選取90例其它漢族患兒作為對照組，對照組的患兒可患有壞死性小腸結(jié)腸炎、先天性腸道閉鎖等腹部先天性疾病，對照組患兒以胎齡、性別、出生體重等方面與NRDS組相匹

3、配。所有研究對象在臨床確診或住院后抽取抗凝全血樣本。采用DNA抽提試劑盒提取基因組DNA，通過PCR分別對SP-C基因的exonⅠ、Ⅱ、Ⅲ進行擴增，并對擴增產(chǎn)物進行基因測序，用基因計數(shù)法計算基因頻率，運用Hardy-Weinberg平衡法則進行遺傳平衡吻合度檢驗。采用x2檢驗比較組間基因型、基因頻率及差異的顯著性，并分析不同基因型以及等位基因頻率與所研究的NRDS發(fā)病及嚴重程度的關(guān)聯(lián)性。
　　結(jié)果:
　　(1) SP-C基因

4、exonⅡ存在c.115G＞T和c.139G＞C兩種雜合錯義突變，均引起SP-C蛋白序列改變，僅在NRDS組發(fā)現(xiàn);SP-C基因exonⅢ存在c.228G＞C雜合同義突變，并未引起氨基酸的改變，在NRDS組和對照組發(fā)現(xiàn)。以上3種基因突變迄今尚未見國內(nèi)外報道;在exonⅠ未發(fā)現(xiàn)任何基因突變。
　　(2) NRDS組在SP-C基因exonⅡ存在c.115G＞T雜合錯義突變，此突變存在GG（野生型）、G/T（突變型）2種基因型。突變(G/

5、T)基因型頻率為0.078，突變(T)等位基因頻率為0.039。NRDS組G/T基因型頻率(0.078)高于對照組(0)(x2=7.283，p＜0.05)，NRDS組T等位基因頻率(0.039)高于對照組(0)(x2=7.139，p＜0.05)。NRDS組90例研究對象中，55例患兒胸片示NRDSⅢ-Ⅳ級改變，G/T基因型頻率(1.000)高于GG基因型頻率(0.578)(x2=4.830，p＜0.05)，T等位基因頻率(1.000)高

6、于G等位基因頻率(0.595)(x2=4.635，p＜0.05)。7例患兒死亡，G/T基因型頻率(0.571)高于GG基因型頻率(0.036)(x2=25.788，p＜0.01)，T等位基因頻率(0.571)高于G等位基因頻率(0.058)（x2=24.744，p＜0.01）。
　　(3) NRDS組在SP-C基因exonⅡ存在c.139G＞C雜合錯義突變，此突變存在GG（野生型）、G/C（突變型）2種基因型。突變(G/C)基因型

7、頻率為0.067，突變(C)等位基因頻率為0.033。NRDS組G/C基因型頻率(0.067)高于對照組(0)(x2=6.207，p＜0.05)，NRDS組T等位基因頻率(0.033)均高于對照組(0)(x2=6.102，p＜0.05)。NRDS組90例研究對象中，64例剖宮產(chǎn)中，G/C基因型頻率(0.167)低于GG基因型頻率(0.750)(x2=9.276，p＜0.01)，C等位基因頻率(0.167)低于G等位基因頻率(0.730)

8、（x2=8.956，p＜0.01）。55例患兒需要3-4劑肺表面活性物質(zhì)治療， G/C基因型頻率(0.167)低于GG基因型頻率(0.643)(x2=5.343，p＜0.05)，C等位基因頻率(0.167)低于G等位基因頻率(0.626)(x2=5.159，p＜0.05)。
　　(4) NRDS組和對照組在SP-C基因exonⅢc.228G＞C雜合同義突變，此突變存在GG（野生型）、G/C（突變型）2種基因型。NRDS組突變(G/

9、C)基因型頻率為0.089，突變(C)等位基因頻率為0.044。NRDS組G/C基因型頻率(0.089)高于對照組(0.011)(x2=5.731，p＜0.05)，NRDS組C等位基因頻率(0.044)高于對照組(0.006)(x2=5.584，p＜0.05)。該位點突變與所研究的臨床指標無關(guān)聯(lián)性(p＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1)本研究在中國漢族人群SP-C基因的exonⅡ、Ⅲ發(fā)現(xiàn)了c.115G＞T、c.139G＞C