兒童再生障礙性貧血與幼年特發(fā)性關節(jié)炎細胞因子及GAST-5、NLRP-3基因的對比研究.pdf

1、研究目的：
　　比較 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF-α和IFN-γ7種細胞因子及NLRP-3、GAST-5 mRNA在兒童AA和s-JIA中的表達水平，探究其在AA和S-JIA發(fā)病機制中的作用。
　　研究對象及方法：
　　1．收集我院初治AA患兒38例（SAA為26例，N-SAA為12例）、初治JIA患兒28例（S-JIA為13例，少關節(jié)型JIA為15例）、正常健康體檢兒童（20例）的

2、清晨空腹外周血各3ml入干燥管中，低速離心后提取上層血清保存于凍存管中，放-80℃保存?zhèn)溆?，待標本收集齊全后應用Aimplex? Human Th1/Th2/Th177-plex kit試劑盒，利用流式細胞術檢測血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF-α和IFN-γ7種細胞因子的水平。
　　2．收集我院AA患兒21例（SAA為13例，N-SAA為7例）、JIA患兒17例（S-JIA為8例，少關節(jié)型JI

3、A為9例）的骨髓液各2ml，以及AA患兒32例（SAA為21例，N-SAA為11例）、JIA患兒28例（S-JIA為13例，少關節(jié)型JIA為15例）、正常健康體檢兒童（20例）的清晨空腹外周血各3ml，應用密度梯度離心法分離骨髓單個核細胞，參照Trizol試劑說明書提取骨髓及外周血單個核細胞中總 RNA，檢測 RNA的純度及完整性；應用反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA；采用Real-time PCR測定NLRP-3、GAST-5 mRNA的相對

4、表達水平。
　　結果：
　　1血清中細胞因子水平的比較：
　?。?）在N-SAA組、SAA組及正常對照組中的比較：
　　IL-2、IL-6、IL-17A、TNF-α、IFN-γ水平在SAA組均高于正常對照組，TNF-α、IFN-γ水平在SAA組高于N-SAA組，IL-4在SAA組和N-SAA組都低于正常對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；IL-10水平在N-SAA組、SAA組及正常對照組三組間比較差異無統(tǒng)

5、計學意義（P＞0.05）。
　?。?）在S-JIA組、JIA少關節(jié)型組及正常對照組中的比較：
　　IL-6、IL-17A、TNF-α水平S-JIA組高于正常對照組，TNF-α水平S-JIA組高于JIA少關節(jié)型組，IL-10水平在S-JIA組低于正常對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；IFN-γ水平JIA少關節(jié)型組和S-JIA組均高于正常對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；IL-2、IL-4水平 S-JIA組與

6、正常對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　（3）在SAA組、S-JIA組及正常對照組中的比較：
　　IL-2、IL-6、IL-10、IL-17A、IFN-γ水平在SAA組高于S-JIA組，IL-4、TNF-α水平在SAA組低于S-JIA組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　2 GAST-5、NLRP-3 mRNA表達水平的比較：
　　（1）在骨髓液中表達情況的比較
　　GAST-5、NL

7、RP-3 mRNA在S-JIA組高于N-SAA組、SAA組，GAST-5 mRNA在JIA少關節(jié)型組高于N-SAA組、SAA組，NLRP-3 mRNA在S-JIA組高于JIA少關節(jié)型組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　?。?）在外周血中表達情況的比較
　　GAST-5、NLRP-3 mRNA在S-JIA組的表達水平均高于N-SAA組、SAA組及正常對照，NLRP3 mRNA在S-JIA組高于JIA少關節(jié)型組，差異均有統(tǒng)

8、計學意義（P＜0.05）。
　　（3）GAST-5、NLRP-3 mRNA分別在骨髓液及外周血中表達水平的比較
　　GAST-5 mRNA在SAA組骨髓液中低于外周血，NLRP-3 mRNA在S-JIA組、JIA少關節(jié)型組骨髓液中的表達水平均高于外周血，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結論：
　　1.IL-6、IL-17、TNF-α和IFN-γ參與AA和s-JIA的發(fā)病機制；IL-6、IL-17和IFN-

9、γ在AA中表達高于S-JIA，提示這3種細胞因子升高到一定界值后，可能會導致骨髓衰竭；TNF-α在S-JIA中表達高于AA，提示TNF-α在不同的界值水平，作用機制不同，導致不同的臨床表現(xiàn)。
　　2.IL-4為AA造血的調(diào)節(jié)因子之一；IL-10可拮抗S-JIA的炎癥反應，抑制炎癥反應的發(fā)生。
　　3.GAST-5mRNA水平降低是導致 AA骨髓衰竭及外周血三系減少的原因之一；NLRP-3 mRNA水平升高，是導致S-JIA產(chǎn)