醌氧化還原酶及其抑制劑在乳腺癌增殖與遷移中的作用研究.pdf

1、乳腺癌是全球女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，也是女性死亡的第二大原因。醌氧化還原酶（NQO1）是一種保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷的黃色素酶，更是一種人體內(nèi)一種非常重要的化學(xué)致癌物代謝酶。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，NQO1在黑色素瘤、胰腺癌、肝內(nèi)膽管癌、肺癌和乳腺癌等多種惡性腫瘤中表達(dá)異常，并與這些腫瘤的早期診斷和不良預(yù)后關(guān)系密切，但尚未見(jiàn)其與乳腺癌之間的關(guān)系報(bào)道。β-拉帕醌（β-lapachone）是NQO1蛋白的一種有效抑制劑，提取于中南美洲紫檀樹(shù)的樹(shù)皮中，研究

2、表明，β-拉帕醌可誘導(dǎo)前列腺癌、乳腺癌、白血病等多種腫瘤細(xì)胞的凋亡，也可作為一種治療結(jié)腸癌和前列腺癌的放射增敏劑，但其在乳腺癌中的作用和機(jī)制尚不清楚。
　　目的：探討NQO1蛋白過(guò)表達(dá)在乳腺癌中的臨床病理學(xué)意義及在預(yù)后評(píng)估中的臨床意義；深入研究其抑制劑β-拉帕醌體外抑制乳腺癌增殖與遷移能力的作用機(jī)制。
　　材料和方法：應(yīng)用免疫組化方法在52例癌旁正常組織、22例乳腺增生組織、45例乳腺原位癌組織（DCIS）和176例乳腺癌組

3、織中檢測(cè)NQO1蛋白的表達(dá)情況，采用細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NQO1在MCF-7乳腺癌細(xì)胞中的定位情況；并利用qRT-PCR和Western blot方法檢測(cè)8例新鮮乳腺癌及癌旁正常組織中NQO1基因mRNA和蛋白水平的表達(dá)，分析NQO1異常表達(dá)與乳腺癌臨床病理學(xué)特征之間的相關(guān)性，生存期分析驗(yàn)證NQO1對(duì)患者預(yù)后評(píng)估的價(jià)值。傳代培養(yǎng) MCF-7乳腺癌細(xì)胞株；噻唑藍(lán)（MTT）實(shí)驗(yàn)檢測(cè)與增殖、凋亡、EMT標(biāo)志物及PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通

4、路相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用；通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)β-拉帕醌抑制MCF-7乳腺癌細(xì)胞遷移的能力；Western-blot法檢測(cè)β-拉帕醌處理對(duì) MCF-7乳腺癌細(xì)胞中 NQO1蛋白、增殖標(biāo)志物、EMT標(biāo)志物及PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：1.乳腺癌新鮮組織的Western blot及qRT-PCR方法檢測(cè)顯示，乳腺癌組織中NQO1的蛋白及mRNA的水平明顯高于癌旁正常組織；免疫組化結(jié)果

5、亦表明，NQO1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率和強(qiáng)陽(yáng)性率（84.7％、61.9%）明顯高于DCIS組織（51.1%、31.1%）、乳腺增生組織（36.7%、13.6%）及癌旁正常組織（30.8%、13.5%），差異顯著（P<0.05）；NQO1蛋白高表達(dá)與乳腺癌患者的分化程度、臨床分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Her2表達(dá)水平密切相關(guān)。生存期分析顯示，NQO1高表達(dá)的乳腺癌患者的無(wú)瘤生存期及10年生存期均低于NQO1低表達(dá)者（P<0.01）；單因素分析顯示NQ

6、O1表達(dá)聯(lián)合分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Her2表達(dá)水平可以共同影響總生存率，但多因素分析結(jié)果表明，只有臨床分期、NQO1及Her2表達(dá)水平是乳腺癌不良預(yù)后的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因子；2. MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，β-拉帕醌（濃度為4μM）給藥處理后，MCF-7細(xì)胞的增殖能力明顯下降（P<0.05），Western blot結(jié)果顯示，β-拉帕醌通過(guò)下調(diào)Skp2和DEK蛋白的表達(dá)調(diào)節(jié)參與乳腺癌細(xì)胞的增殖調(diào)控。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，β-拉帕醌（濃度為4μM

7、）可以明顯抑制MCF-7細(xì)胞的遷移能力（P<0.05）。而且Western blot結(jié)果表明，β-拉帕醌主要通過(guò)下調(diào)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）間質(zhì)標(biāo)記物Snail、Vimentin、GSK-3β等的表達(dá)水平、上調(diào)EMT上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)影響MCF-7細(xì)胞的遷移能力；3.β-拉帕醌可以下調(diào)MCF-7細(xì)胞中PI3K/Akt/mTOR相關(guān)信號(hào)通路蛋白p-AKT和p-PTEN的表達(dá)。
　　結(jié)論：1. NQO1高表達(dá)與乳腺癌的預(yù)