尿毒癥毒素硫酸鹽對(duì)甲酚促心臟舒張功能不全及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　慢性腎?。╟hronic kidney disease，CKD）患者心血管疾?。╟ardiovascular disease，CVD）發(fā)生率是普通人群的10~30倍，CVD病死率更是占CKD全部死因的50%。CKD對(duì)心血管系統(tǒng)的損害具體體現(xiàn)在促進(jìn)心肌纖維化和心力衰竭（heart failure，HF）、促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis）、增加大動(dòng)脈僵硬度（arteril stiffness）、促進(jìn)血管鈣

2、化（vascular calcification）等方面。其中HF是CKD患者的主要心源性死因，其所占比例高達(dá)30%。以往對(duì)CKD患者HF的研究主要集中在收縮功能不全，以射血分?jǐn)?shù)（ejection fraction，EF）作為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)。近年的研究顯示，舒張功能不全（diastolic dysfunction，DD）在CKD患者中的發(fā)生率亦顯著上升，且其發(fā)生時(shí)間更為提早，提示其可能為CKD患者HF發(fā)生發(fā)展的始動(dòng)環(huán)節(jié)。
　　除高血

3、壓、糖尿病、高脂血癥、腎素-血管緊張素系統(tǒng)（renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS）異常激活等傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素可能參與CKD患者HF的發(fā)生發(fā)展外，近年研究顯示，特異潴留于CKD患者體內(nèi)的尿毒癥毒素（uremic toxins）也參與HF進(jìn)展，與此相關(guān)的尿毒癥性心肌病已受臨床關(guān)注多年。臨床研究已證實(shí)其中主要毒素硫酸吲哚酚（indoxyl-sulfate，IS）與DD存在正相關(guān)。本課題旨在闡明另一主要

4、尿毒癥毒素硫酸鹽對(duì)甲酚（p-cresyl sulfate，PCS）在CKD患者DD發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用及機(jī)制。
　　方法：
　　本論文擬通過(guò)臨床研究及在體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩方面研究PCS促心臟舒張功能不全的作用效應(yīng)及機(jī)制：
　　臨床研究：1）借助我院腎臟內(nèi)科完善的血液透析平臺(tái)，收集行規(guī)律血液透析的病人共170例（血透時(shí)間≥6月），排除既往心血管疾病史、惡性腫瘤病史、合并系統(tǒng)性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合癥等；2）通過(guò)超聲技術(shù)

5、測(cè)定各例患者升主動(dòng)脈內(nèi)徑（aorta ascendens，AAO）、左房?jī)?nèi)徑（left atrial，LA）、左室舒張末內(nèi)徑（left ventricular diastolic diameter，LVDD）、左室收縮末內(nèi)徑（left ventricular systolic diameter，LVSD）、室間隔內(nèi)徑（interventricular septum，IVS）、左室后壁厚度（Left ventricular posteri

6、or wall，LVPW）、左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）等參數(shù)，其中LVEF<50%作為排除標(biāo)準(zhǔn)；同時(shí)運(yùn)用脈沖多普勒測(cè)量二尖瓣舒張?jiān)缙谘鞣逯盗魉伲‥）、舒張晚期血流峰值速度（A），組織多普勒測(cè)定二尖瓣環(huán)舒張?jiān)缙谘魉俣龋‥’）和晚期峰值血流速度（A’），計(jì)算E/E’比值，判定各例患者左室舒張功能狀態(tài)；3）收集各例患者一般情況包括年齡、性別、糖尿病、高血壓、BMI指數(shù)等，

7、以及常規(guī)生化指標(biāo)包括肝功能、腎功能、電解質(zhì)、血脂、心功能等；4）收集各例患者血漿，運(yùn)用高效液相－串聯(lián)質(zhì)譜（high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry，HPLC-MS/MS）方法對(duì)患者體內(nèi)游離PCS及總PCS濃度行定量檢測(cè)；5）多因素回歸分析PCS濃度與舒張功能不全的潛在相關(guān)性。
　　在體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：1）分別建立正常對(duì)照（control）、單側(cè)腎切除（

8、unilateral nephrectomy，UNX）、5/6腎切除（5/6 nephrectomy，CRF）小鼠模型，各組小鼠予以單次PCS灌胃（50mg/kg），于給藥后0，15，30，60，120，180，240分鐘分別行眼眶靜脈叢穿刺采血，分離血漿，運(yùn)用HPLC-MS/MS方法檢測(cè)其中PCS濃度水平，得到PCS在不同腎功能狀態(tài)下小鼠體內(nèi)的代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)；2）在得到有關(guān)PCS代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)后，建立最佳單純PCS干預(yù)小鼠模型，運(yùn)用心

9、臟超聲、壓力導(dǎo)管、組織病理、分子免疫等方法研究PCS促舒張功能不全效應(yīng)及機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1）多因素回歸分析發(fā)現(xiàn)，CKD患者體內(nèi)游離PCS濃度水平與左室舒張功能不全存在相關(guān)性；
　　2）PCS在正常對(duì)照、單側(cè)腎切除、5/6腎切除小鼠體內(nèi)的半衰期分別為0.48±0.02、0.79±0.04、12.07±0.12小時(shí)，提示單側(cè)腎切除小鼠可能為研究PCS在體致病效應(yīng)的最佳模型；
　　3）在體實(shí)驗(yàn)證實(shí)單純PCS干預(yù)