TRPV1-ASIC3在急性胃黏膜損傷修復(fù)中的表達(dá)及SMIR術(shù)對其的影響.pdf

1、急性胃黏膜損傷(acute gastric mucosal lesion，AGML)是臨床常見的并發(fā)癥，病死率高。它的發(fā)病及修復(fù)過程受多因素、多途徑調(diào)控，尚不完全明確，繼續(xù)探索AGML的危險因素，尋求能夠干預(yù)其進程的靶點具有重要的意義。
　　過度、持續(xù)性傷害應(yīng)激是誘發(fā)AGML的最重要因素。困難、復(fù)雜手術(shù)是并發(fā)AGML的常見應(yīng)激源;中小手術(shù)未列為AGML的高危因素及可增加AGML并發(fā)出血的危險因素。然而，臨床上，實施中小手術(shù)也可明顯

2、增加高危人群AGML的發(fā)病率并加重病情。因此，我們擬通過動物實驗，明確中小手術(shù)創(chuàng)傷及術(shù)后疼痛是否作為傷害性應(yīng)激，可加重AGML的損傷程度、延緩修復(fù)。
　　近年來，分布于胃組織的瞬時受體電位香草酸亞型1(transient receptor potentialvanilloid1，TRPV1)和酸離子敏感通道3(acid-sensing ion channel3，ASIC3)作為傷害性感受器對局部應(yīng)激的調(diào)控作用日益受到重視。位于胃黏

3、膜細(xì)胞上的TRPV1，可通過調(diào)節(jié)黏膜血流量、胃酸分泌、胃動力等因素對黏膜防御機制發(fā)生影響;TRPV1參與調(diào)控血管內(nèi)皮細(xì)胞、角膜上皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞等一些胃外組織損傷后修復(fù)過程。ASIC3在消化道中的分布和功能研究尚處于起步階段，少量研究顯示在食管、結(jié)腸、胃組織均表達(dá)或可誘導(dǎo)表達(dá)ASIC3，在消化道信息處理過程中有重要作用。本課題組已證實TRPV1/ASIC3參與AGML的發(fā)生和調(diào)控，我們擬在此基礎(chǔ)上進一步研究其在胃黏膜損傷后修復(fù)過程中的表

4、達(dá)及作用。
　　此外，TRPV1/ASIC3更大量分布于軀體感覺神經(jīng)系統(tǒng)，在術(shù)后急性痛敏發(fā)生過程中發(fā)揮重要的作用。本課題組已發(fā)現(xiàn)舒芬太尼預(yù)先給藥可激活A(yù)GML大鼠胃黏膜TRPV1，對胃黏膜起保護作用，ASIC3拮抗劑預(yù)處理可減輕胃黏膜損傷。由此我們推測，中小手術(shù)創(chuàng)傷及疼痛可能會改變胃黏膜細(xì)胞中TRPV1/ASIC3的活性，調(diào)控胃黏膜損傷及修復(fù)的過程。
　　研究目的：
　　通過動物實驗，初步探索:1、急性胃黏膜損傷后修復(fù)

5、過程中TRPV1/ASIC3的表達(dá)及意義;2、SMIR術(shù)對浸水應(yīng)激大鼠胃黏膜損傷后修復(fù)及TRPV1/ASIC3表達(dá)的影響，進一步探討TRPV1/ASIC3在其中所發(fā)揮的作用及機制。旨在提高對TRPV1/ASIC3在胃黏膜損傷、修復(fù)病理生理過程中的認(rèn)識，為圍手術(shù)期控制應(yīng)激、防治AGML提供新思路。
　　研究方法：
　　1、第一部分:50只Wistar大鼠，隨機分為正常對照組(NC組)、浸水束縛應(yīng)激(water immersio

6、n restraint stress，WIRS)模型組（WIRS組）、應(yīng)激后2h組(W2h組)、1天組（W1d組）、3天組（W3d組），各10只。觀察檢測指標(biāo):(1)一般情況，體溫;(2)胃黏膜損傷愈合情況，評定UI值;(3)胃組織含水量;(4)胃液PH值;(5)血清SOD、MDA，計算SOD/MDA值;(6)胃組織HE染色;(7)免疫組化法檢測TRPV1、ASIC3通道在胃組織定位及表達(dá);(8) Q-PCR法檢測胃黏膜TRPV1 mR

7、NA、ASIC3mRNA相對表達(dá)量。
　　2、第二部分:56只Wistar大鼠，隨機分為正常對照組(NC組)和實驗組，實驗組分為WIRS組及WIRS后SMIR術(shù)組，WIRS組又分為應(yīng)激后2小時組（W2h組）、1天組（W1d組）、3天組（W3d組），WS組同理分為WS2h組、WS1d組、WS3d組，各8只。觀察檢測指標(biāo):不監(jiān)測體溫，余同第一部分。
　　研究結(jié)果：
　　1、第一部分:應(yīng)激后，胃黏膜損傷明顯。WIRS、W2h

8、組肛溫明顯低于正常(P＜0.05)，1天后恢復(fù)正常。與NC組相比，WIRS組UI升高;W2h組與WIRS組無統(tǒng)計差異，高于NC組(P＜0.05);W1d組高于NC組(P＜0.05)，低于WIRS、W2h組(P＜0.05);W3d組與NC組無統(tǒng)計學(xué)差異，低于WIRS、W2h、W1d組(P＜0.05)。組織含水量在WIRS、W2h、W1d、W3d組均較NC組升高，以WIRS、W2h組最高，兩組間無統(tǒng)計差異;W1d組較該兩組下降(P＜0.05

9、);W3d組與W1d組無統(tǒng)計差異。與NC組比較，WIRS、W2h組胃液pH明顯降低(P＜0.05);W1d、W3d組上升，且高于W2h、WIRS及NC組(P＜0.05)，兩組間無統(tǒng)計差異。相較于NC組，WIRS、W2h組血清SOD、MDA、SOD/MDA均升高(P＜0.05);W1d、W3d組無統(tǒng)計學(xué)差異;與WIRS、W2h組相比，W1d組該三項指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異，W3d組SOD降低、SOD/MDA上升(P＜0.05)而MDA無明顯變化

10、;與W1d組相比，W3d組SOD降低(P＜0.05)，余兩項無統(tǒng)計學(xué)差異。WIRS、W2h組TRPV1較NC組相比減少(P＜0.05)，以損傷灶胃小凹周圍細(xì)胞TRPV1表達(dá)減少最明顯，兩組間無統(tǒng)計差異;W1d組較該兩組組繼續(xù)降低(P＜0.05);3d組升高至高于W1d、W2h、WIRS組(P＜0.05)，與NC組無統(tǒng)計學(xué)差異。WIRS、W2h組ASIC3較NC組增加（P＜0.05），兩組間無統(tǒng)計差異;W1d組較W2h、WIRS及NC組明

11、顯降低(P＜0.05);W3d組上升，高于W1d組（P＜0.05），但仍低于W2h、WIRS及NC組（P＜0.05）。
　　2、第二部分:WS組較WIRS組損傷加重、修復(fù)延遲。析因分析表明，UI、組織含水量、SOD/MDA、胃黏膜TRPV1和ASIC3分別在處理組組間、各時間點間、交互效應(yīng)有統(tǒng)計差異（P＜0.05）;SOD和MDA只在各時間點間、交互效應(yīng)有統(tǒng)計差異;胃液pH僅在交互效應(yīng)有統(tǒng)計差異。SMIR組各指標(biāo)隨時間變化趨勢與W

12、IRS組一致。應(yīng)激后2小時、1天及3天，WS組UI均高于WIRS組(P＜0.05);WS組組織含水量在應(yīng)激后2小時、1天高于WS組（P＜0.05），3天后無差異;SOD/MDA應(yīng)激后2小時，WS組顯著低于WIRS組(P＜0.05)，1天后兩組間無明顯差異，3天后WS組高于WIRS組（P＜0.05）;TRPV1在WS組在應(yīng)激后2小時、1天及3天均低于WIRS組（P＜0.05）;ASIC3在WS組在應(yīng)激后2小時低于WIRS組，1天及3天均高

13、于WIRS組(P＜0.05)。TRPV1與UI、SOD/MDA相關(guān)，ASIC3與胃液pH高度正相關(guān)。
　　研究結(jié)論：
　　1、胃黏膜急性損傷后修復(fù)過程中，TRPV1被抑制，3天后恢復(fù);ASIC3呈短暫升高后顯著降低再上升的變化過程，3天后未完全恢復(fù)。TRPV1/ASIC3可能參與調(diào)控胃黏膜損傷后修復(fù)過程。
　　2、SMIR術(shù)加重AGML大鼠胃黏膜損傷程度、延緩修復(fù);抑制胃黏膜TRPV1表達(dá)，TRPV1可能參與其對AGM