姜黃素調(diào)控長鏈非編碼RNA AK125910誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡和抑制侵襲的研究.pdf

1、片姜黃是許多名老中醫(yī)防治慢性肝炎、肝硬化和肝癌經(jīng)驗(yàn)方中的主要藥物之一，大量的實(shí)驗(yàn)研究表明姜黃、菖蒲、莪術(shù)和郁金等中藥的提取物——姜黃素，具有抑制癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。課題研究發(fā)現(xiàn)姜黃素可能通過上調(diào)lncRNA AK125910而抑制肝癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，從而調(diào)控肝癌的發(fā)生發(fā)展。
　　目的:
　　借助lncRNA表達(dá)譜芯片，篩選姜黃素對lncRNA的調(diào)控作用，進(jìn)一步深入研究lncRNA AK125910在肝癌

2、發(fā)生的調(diào)控作用以及姜黃素的干預(yù)機(jī)制。揭示lncRNAAK125910與肝癌的內(nèi)在聯(lián)系，以及姜黃素抑制肝癌細(xì)胞的作用與lncRNA AK125910的關(guān)系。
　　方法:
　　1.采用lncRNA芯片篩選姜黃素處理肝癌細(xì)胞的相關(guān)lncRNA，并使用熒光定量PCR和western blot技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證;構(gòu)建siRNA-AK125910瞬時(shí)轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞，下調(diào)lncRNAAK125910的表達(dá)。采用MTT法檢測細(xì)胞凋亡，Brdu標(biāo)記檢

3、測細(xì)胞增殖，Transewell檢測細(xì)胞侵襲;
　　2.使用生物信息學(xué)技術(shù)檢測lncRNAAK125910的下游靶基因，并使用熒光定量PCR和western blot技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證;
　　3.在構(gòu)建siRNA-AK125910瞬時(shí)轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞的基礎(chǔ)上，檢測與肝癌細(xì)胞增殖、侵襲相關(guān)的蛋白表達(dá)情況，對姜黃素調(diào)控lncRNAAK125910的分子機(jī)制初步探索。
　　結(jié)果:
　　1.使用lncRNA表達(dá)芯片，證實(shí)在姜黃素處

4、理的肝癌細(xì)胞中，lncRNA的fold change＞5的lncRNA有7條，其中有5條表達(dá)增高，包括AK125910、uc009ycs、HMlincRNA717、chrⅩ:149438637-149438034和chr7:155933475-155996100;而2條表達(dá)降低，包括chr1:17129210938-17129213215和AP1879664;其中AK125910的表達(dá)上調(diào)最明顯，為9.78倍。RealtimePCR的結(jié)

5、果顯示，lncRNAAK125910的表達(dá)出現(xiàn)顯著上調(diào)，為空白對照組的8.92±2.33倍(p＜0.001)，這與芯片結(jié)果一致，表明lncRNAAK125910在姜黃素誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡中起到了調(diào)控作用。
　　2.使用MTT、brdu標(biāo)記和Transwell法檢測了lncRNAAK125910在姜黃素誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞中的作用研究，證實(shí)了lncRNA AK125910參與了姜黃素誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡，抑制其增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的作用。
　　3

6、.通過生物信息學(xué)預(yù)測lncRNAAK125910的下游靶基因?yàn)镸UC2和SPAG4，并由RelatimePCR和western blot驗(yàn)證lncRNAAK125910增強(qiáng)MUC2的表達(dá)而抑制SPAG4的表達(dá)。
　　4.通過Relatime PCR和western blot對lncRNAAK125910在姜黃素抑制肝癌細(xì)胞增殖、侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)的作用，lncRNA AK125910參與調(diào)控Bcl-2和BAX、caspase-3和-

7、8、MMP-2和-9的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.肝癌細(xì)胞中l(wèi)ncRNAAK125910表達(dá)明顯升高，姜黃素能下調(diào)肝癌細(xì)胞中l(wèi)ncRNAAK125910;
　　2.下調(diào)lncRNAAK125910的表達(dá)，能抑制肝癌細(xì)胞凋亡，促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖和侵襲，姜黃素通過上調(diào)lncRNAAK125910而促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖和侵襲;
　　3.lncRNAAK125910增強(qiáng)MUC2的表達(dá)而抑制SPAG4的表達(dá)，同時(shí)參與調(diào)