MAPK和MPF在小鼠卵母細胞激活后核仁前體(NPBs)融合中的作用.pdf

1、核仁是細胞進行核糖體RNAs（rRNAs）合成、加工以及與蛋白組裝形成核糖體的場所。卵母細胞受精后，在原核中形成核仁前體（NPBs）。盡管有研究顯示NPBs的組裝，生長和相互融合依賴于原核轉(zhuǎn)錄活動和卵母細胞成熟過程產(chǎn)生的胞質(zhì)因子，但從M期向G1期過渡時核仁前體融合和運動的機制還不清楚。我們通過信號通路抑制劑/激活劑處理、顯微鏡觀察以及蛋白激酶活性分析等方法研究了小鼠卵母細胞激活后MAPK和MPF在NPBs融合中的作用。主要實驗結(jié)果如下：

2、
　　 1.小鼠卵母細胞原核中先形成多個分散的小NPBs，然后這些NPBs逐漸融合，最終形成一個大NPB。
　　 2.酒精激活后3.9小時原核中出現(xiàn)多個小NPBs，經(jīng)過5.5小時融合成一個大NPB，到15.1小時消失。SrCh處理6h時，在開始激活后3.8小時出現(xiàn)多個小NPBs，4.5小時融合成一個大NPB，到18.7小時消失。
　　 3.酒精激活后1小時MPF活性就下降到最低，而MAPK活性直到激活后3小時才開

3、始下降；SrCl2處理6小時激活后MPF和MAPK活性發(fā)生類似變化，只是MAPK高活性維持3小時以上。
　　 4.酒精激活后用MAPK抑制劑U0126或MPF激活劑MG132處理都阻止NPBs融合，但用MPF抑制劑ROS處理則不影響NPBs融合。SrCl2處理5min后或處理6小時過程中用U0126和MG132處理也得到了相同的結(jié)果。
　　 5.酒精和SrCl2處理激活后不同時間用U0126和MG132處理發(fā)現(xiàn)，激活后頭

4、2小時MAPK高活性的維持為NPBs融合所必需，但MPF高活性維持時間越長，NPBs融合越差。
　　 6.新鮮卵在SrCl2激活（6h）過程中，用信號通路抑制劑/激活劑處理對NPBs融合的影響與hCG后18小時卵類似。
　　 7.卵母細胞在體內(nèi)老化過程中MPF和MAPK活性不斷下降，NPBs的融合能力也下降。
　　 總之，小鼠卵母細胞激活后MAPK高活性至少要維持2小時，而MPF活性則必須馬上下降，NPBs才能融