豬卵母細胞孤雌激活方法的研究.pdf

1、本研究以豬體外成熟卵母細胞為實驗材料，分別采用了單次電激活，二次電激活，化學激活以及物理化學聯(lián)合激活方法，對豬體外成熟卵母細胞進行孤雌激活，并比較分析了各方法的激活效果。旨在選擇出較好的孤雌激活方法，以提高豬體外成熟卵母細胞的孤雌激活率和孤雌胚的囊胚發(fā)育率，為提高核移植的成功率，以及進一步研究奠定基礎。
　　 本研究包括以下主要內容：1.選擇不同的電場強度和脈沖時程，做單次電激活，比較不同組合對激活效率的影響。2.固定脈沖時程及

2、脈沖次數(shù)，分別選擇不同的電場強度，做二次電激活，比較不同組合對孤雌激活胚早期發(fā)育的影響。3.不同濃度Ionomycin作用不同時間；Ionomycin分別與6-DMAP、CB及CHx組合；9％Ethanol作用不同時間，對每一組合的激活效率進行比較，旨在研究較好的化學激活方法。4.電激活處理結合化學試劑（6-DMAP、CB及CHX），比較不同組合對體外成熟卵母細胞孤雌激活后孤雌胚早期發(fā)育的影響。
　　 研究結果表明：
　　

3、 1.對于單次電刺激對豬體外成熟卵母細胞孤雌激活參數(shù)的確定，電場強度為2.0kV/cm，脈沖次數(shù)為1次，脈沖時程分別為10、20和30μs的條件對孤雌胚早期發(fā)育的影響無顯著差異，且均為較優(yōu)條件，其中以脈沖時程為30μs最為理想；
　　 2.對于二次電刺激對豬體外成熟卵母細胞的孤雌激活參數(shù)選擇，二次電場強度分別2.0kV/cm和1.4kV/cm，脈沖時程均為30μs，脈沖次數(shù)均為1次的條件為最優(yōu)；
　　 3.不同濃度Io

4、nomycin作用不同時間對豬體外成熟卵母細胞孤雌激活效果的影響，Ionomycin濃度為20mmol/L，作用時間為10min、15min的條件較好，10min最為理想；
　　 4.Ionomycin分別與6-DMAP、CB組合對豬體外成熟卵母細胞孤雌激活后，孤雌胚的卵裂率和囊胚率高于Ionomycin與CHx組；
　　 5.9％Ethanol作用10min、20min組合對豬體外成熟卵母細胞孤雌激活后，孤雌胚的卵裂率