莆田黑豬供體細(xì)胞系建立及卵母細(xì)胞體外成熟和孤雌激活.pdf

1、莆田黑豬具有適應(yīng)性強(qiáng)、耐粗飼料、生長(zhǎng)快、產(chǎn)仔多、抗病力強(qiáng)等特性。作為瀕危品種，亟待保護(hù)。隨著體細(xì)胞核移植技術(shù)的發(fā)展，這種技術(shù)在保種上有了重要的應(yīng)用價(jià)值。 本實(shí)驗(yàn)是基于保種目的的體細(xì)胞核移植技術(shù)的研究，研究了豬體細(xì)胞核移植相關(guān)技術(shù)環(huán)節(jié)，主要內(nèi)容如下： 1.供體細(xì)胞系的建立 利用不同的方法建立供體細(xì)胞系，比較了各種方法的優(yōu)缺點(diǎn)，(1)利用組織塊法和酶消化法建立豬耳成纖維細(xì)胞系，(2)胰酶消化法和機(jī)械刮取法建立了輸卵管

2、上皮細(xì)胞系，(3)分離培養(yǎng)豬卵泡液中的顆粒細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，由組織塊法得到的豬耳成纖維細(xì)胞系生長(zhǎng)狀態(tài)最好而且又能避免對(duì)豬只的損傷，是理想的建系材料。 2.卵母細(xì)胞體外成熟和孤雌激活 優(yōu)化了卵母細(xì)胞體外成熟體系：(1)NCSU-23培養(yǎng)液培養(yǎng)的卵母細(xì)胞體外成熟率(67.83％)顯著高TCM-199培養(yǎng)的組(58.14％)(P<0.05)(2)NCSU-23+10％FBS+10％pFF(77.21％)，比NCSU-23+1

3、0％pFF(72.02％)的成熟效果略高。且囊胚率二者(30.38％和29.70％)都顯著高于NCSU-23+10％FBS(21.32％)。(3)NCSU-23培養(yǎng)液中添加EGF對(duì)成熟率影響不大，但在孤雌激活后，卵裂率、囊胚率上，添加EGF的培養(yǎng)基效果更好(4)經(jīng)5℃冷藏和-18℃凍存的卵母細(xì)胞NCSU-23成熟培養(yǎng)基用于卵母細(xì)胞的成熟培養(yǎng)，其成熟率，孤雌激活后的卵裂率、囊胚率均無(wú)顯著差異(P>0.05)。 經(jīng)多次孤雌激活實(shí)驗(yàn)表