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文檔簡介
1、目的:構(gòu)建含有過氧化氫酶基因(catalase,cat)的基因工程乳酸菌(Lactic acid bac-teria,LAB),為發(fā)展環(huán)境抗性的基因工程乳酸菌提供試驗方法,奠定理論基礎(chǔ)。
方法:培養(yǎng)大腸桿菌(E.coli W3110),提取基因組DNA,采用限制性內(nèi)切酶Sau3AI進行部分酶切,分離純化1.5Kb以上的DNA片段。BamHI酶切大腸桿菌質(zhì)粒pUC18后,與經(jīng)Sau3AI部分酶切不同片段用T4連接酶進行連接,
2、轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α。通過BHI-單寧酸培養(yǎng)介質(zhì),先厭氧培養(yǎng),再有氧培養(yǎng),誘導過氧化氫酶酶活性,從而篩選出含有過氧化氫酶的基因克隆。將篩選出的基因片段與經(jīng)BamHI酶切后的乳酸乳球菌表達載體質(zhì)粒pRV300連接,將重組質(zhì)粒pRV300-cat電轉(zhuǎn)入乳酸乳球菌NZ9000中,篩選出轉(zhuǎn)化子NZ9000-cat,對重組菌株進質(zhì)粒抽提,鑒定。
結(jié)果:分離到了大腸桿菌過氧化氫酶基因,并將重組質(zhì)粒pRV300-cat電轉(zhuǎn)入NZ9000
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