產(chǎn)L-乳酸的大腸桿菌基因工程菌的構(gòu)建.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè)，還剩49頁(yè)未讀， 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、本文利用含有質(zhì)粒pKD46的大腸桿菌菌株BW25113。在阿拉伯糖誘導(dǎo)后，表達(dá)入噬菌體的3個(gè)重組蛋白Gam，Bet和Exo。Gam蛋白抑制了宿主的RecBCD核酸外切酶V活性，而B(niǎo)et和Exo參與了基因重組過(guò)程，因此宿主菌就具有了同源重組的能力。設(shè)計(jì)的引物5'端有39 bp的擬敲除基因的同源臂，3'端為擴(kuò)增引物，以pKD3(或pKD4)為模板，擴(kuò)增兩側(cè)含F(xiàn)RT位點(diǎn)的氯霉素(或卡那霉素抗性)基因，將此線性片段電轉(zhuǎn)入具重組功能的感受態(tài)細(xì)胞，

2、利用氯霉素(或卡那霉素抗性)平板就可以篩選到陽(yáng)性轉(zhuǎn)化體。再利用表達(dá)FlP重組酶的質(zhì)粒pCP20，可將FRT位點(diǎn)之間的氯霉素(或卡那霉素抗性)抗性基因刪除。利用該重組系統(tǒng)，構(gòu)建了乙醇脫氫酶(adhE)、D-乳酸脫氫酶(IdhA)雙缺失的大腸桿菌工程菌株BW25113D，乙酸激酶(ackA)缺失的大腸桿菌工程菌株(BW25113)。并將表達(dá)牛鏈球菌L-乳酸脫氫酶基因(IdhL)的pSE380質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BW25113D菌株中，利用SDS-PA

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽，若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間，僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請(qǐng)與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論