趕黃草提取物對膽汁淤積性肝細胞損傷的保護作用.pdf

1、目的:結(jié)扎膽總管(bile duct ligation，BDL)建立大鼠膽汁淤積性肝細胞損傷模型。建立隨機對照實驗，用趕黃草提取物(the extractsfrom Penthorum chinense Pursh，EFPCP)進行干預。觀察模型動物的肝臟功能變化，肝組織光鏡、電鏡病理學變化，檢測肝丙二醛(malonicdialdehyde，MDA)含量，活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)濃度及超氧化物歧

2、化酶(superoxide Dismutase，SOD)活性及線粒體膜的流動性。通過氧化應激損傷和保護途徑指標的檢測和對細胞超微結(jié)構(gòu)的觀察了解趕黃草提取物對大鼠膽汁淤積性肝細胞損傷的保護作用。
　　方法:1.大鼠膽汁淤積性肝細胞損傷模型的建立:SPF級雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，體重(200±20)g，于SPF級無菌動物飼養(yǎng)房正常飼養(yǎng)7天適應環(huán)境后，2％苯巴比妥100mg/kg腹腔內(nèi)注射麻醉，剖腹顯露膽總管并游離

3、，雙線結(jié)扎膽總管，并于兩線間離斷膽總管，建立動物模型。2.實驗分組:隨機選取15只未造模的大鼠（同齡正常飲食飲水）為正常對照組（組1）。將45只膽總管結(jié)扎的大鼠隨機分為3組，每組15只。分別為:單純膽總管結(jié)扎組（組2），趕黃草提取物干預組（組3），熊去氧膽酸干預組（組4）。3.實驗干預:在造模后第2日開始每日灌胃，容量均為4mL，1次/日，持續(xù)共4周。組1和組2給予趕黃草提取物等容量的生理鹽水灌胃;組3給予趕黃草提取物(4000mg·k

4、g-1)灌胃;組4，給予熊去氧膽酸(ursodeoxycholic acid，UDCA)(30mg·kg-1)灌胃。4.實驗檢測:分別于術前30min、術后3d、術后7d、術后14d對4組大鼠心臟穿刺抽血2ml檢測血清肝功能指標:谷草轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine transaminase，ALT)、白蛋白(albumin，ALB)、總膽紅素(total bilirub

5、in，TBIL)、直接膽紅素(direct bilirubin，DBIL)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)。在術后7d、14d分別對4組大鼠取肝組織活檢（死亡大鼠及時尸檢并行肝組織標本取檢）。部分肝組織觀察光鏡、透射電鏡下肝組織病理學及細胞超微結(jié)構(gòu)改變，取部分肝組織制成肝組織勻漿，檢測活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(malonic dialdehy

6、de，MDA)及抗氧化酶超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)變化及線粒體膜的流動性。
　　結(jié)果:1.肝功能檢測結(jié)果:術后3d、7d、14d，組2AST、ALT、TBIL、DBIL、ALP均明顯高于組1(P＜0.05)，組3、組4與組2比較AST、ALT、TBIL、DBIL、ALP明顯降低（P＜0.05），組3術后7d、14d TBIL、DBIL較組4低，且有明顯差異(P＜0.05)。組1、組2、組3、

7、組4 ALB在術后3d、7d、14d無明顯差異（P＞0.05）。2.光鏡病理學結(jié)果:組1術后7d、14d病理學無明顯改變:肝小葉的結(jié)構(gòu)完整，可見肝小葉長軸中央走形的中央靜脈，肝血竇及肝索呈放射狀排列圍繞在中央靜脈周圍，細胞排列整齊，肝細胞索呈明顯的放射狀，匯管區(qū)無變形、壞死及炎癥細胞浸潤。組2術后7d:肝小葉結(jié)構(gòu)不完整，輪廓不清，肝細胞呈扁平形，膽管上皮細胞腫脹、壞死，匯管區(qū)有炎癥細胞浸潤，肝細胞明顯腫脹，部分呈空泡樣變性。術后14d:

8、小葉結(jié)構(gòu)混亂，中央靜脈擴張，匯管區(qū)擴大變形，大量炎癥細胞浸潤，肝細胞大面積腫脹，呈空泡樣變，中央靜脈及匯管區(qū)周圍膠原沉積。與組1比較肝組織損傷嚴重。組3、組4術后7d、14d:肝小葉結(jié)構(gòu)較完整，小葉間膽管基本正常，匯管區(qū)有少量炎癥細胞浸潤，肝細胞形態(tài)正常，部分腫脹，個別呈空泡樣變性。肝組織損傷程度較組2明顯減輕。3.電鏡病理學結(jié)果:組1術后7d:相鄰的肝細胞排列整齊，分界清楚，結(jié)構(gòu)正常，細胞核大而圓，核仁清晰而明顯，染色質(zhì)分布正常，核膜

9、結(jié)構(gòu)清晰，線粒體結(jié)構(gòu)正常，嵴結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)清楚，排列規(guī)則，胞質(zhì)內(nèi)富含糖原，染色均勻。組1術后14d與術后7d肝細胞超微結(jié)構(gòu)無明顯變化。組2術后7d:部分細胞明顯水腫，胞內(nèi)出現(xiàn)大小不等脂滴，細胞核邊聚，核大，異染色質(zhì)增多，核膜皺縮，線粒體腫脹，部分嵴斷裂，核周隙增寬。術后14d:肝細胞明顯水腫，胞內(nèi)大量脂滴，細胞核呈現(xiàn)邊集征象，核膜皺縮，線粒體明顯腫脹，部分嵴斷裂，呈空泡樣變。組3、組4術后7d、14d:細胞結(jié)構(gòu)基本正常，線粒體稍水

10、腫、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，損傷較輕。兩組間肝細胞超微結(jié)構(gòu)無明顯差異。4.脂質(zhì)過氧化指標結(jié)果:組2術后7d、14d MDA、ROS持續(xù)升高，明顯高于組1(P＜0.05)，組3、組4術后7d、14dMDA、ROS均低于組2(P＜0.05)，兩組間MDA、ROS無明顯差異(P＞0.05)。組2術后7d、14d SOD降低，明顯低于組1(P＜0.05)，組3、組4術后7d、14dSOD均高于組2(P＜0.05)，兩組間SOD無明顯差異(P＞0.05)。<