蕨麻醇提取物對缺氧性心肌損傷的保護作用及其機制的研究.pdf

1、目的：研究蕨麻乙醇提取物對體外培養(yǎng)心肌細胞缺氧損傷的保護作用及機制，對慢性缺氧小鼠心肌損傷的保護作用及機制。 方法：細胞培養(yǎng)研究：(1)取新生1-3d的SD大鼠心肌細胞原代培養(yǎng)，采用MTT法檢測不同缺氧時間細胞的存活率，以確定心肌細胞的最佳缺氧時間，建立心肌細胞缺氧損傷模型。(2)將搏動狀態(tài)良好，生長密度無明顯差異的心肌細胞隨機分為正常對照組、缺氧損傷模型組、蕨麻醇提物0.024g/ml、0.012g/ml、0.006g/ml干

2、預(yù)組(缺氧同時加入蕨麻乙醇提取物)。缺氧6h后，采用生化手段檢測培養(yǎng)基中乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性，研究蕨麻對缺氧致心肌細胞膜損傷的保護作用；檢測細胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)活性及脂質(zhì)氧化代謝產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量，研究蕨麻對缺氧致心肌細胞脂質(zhì)過氧化損傷的保護作用；采用H.E染色、透射電鏡技術(shù)研究蕨麻對缺氧損傷心肌細胞組織形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的影響；采用Hochest-PI染色及流式細胞術(shù)，研究蕨麻對心肌細胞凋亡率的影響；

3、采用細胞免疫染色方法探討蕨麻影響缺氧損傷心肌細胞凋亡的機制。 動物實驗研究：健康成熟雌性小鼠(25-30g)，隨機分為正常對照組、慢性缺氧模型組、蕨麻醇提物5g/kg、2.5g/kg干預(yù)組(每日缺氧前1小時給予蕨麻乙醇提取物)。模型組與蕨麻干預(yù)組小鼠置于自制缺氧罐內(nèi)，通入含(10±0.5)％02的氮氧混合氣體，8h/d，連續(xù)14d，建立慢性缺氧小鼠損傷模型。對照組于外界正常環(huán)境下飼養(yǎng)。末次缺氧結(jié)束后立即處死各組小鼠，取血清檢測L

4、DH、CK、SOD活性及MDA含量；取心肌組織做石蠟切片，進行Nagar-Olsen特殊染色，觀察各組心肌缺氧損傷程度，進行bcl-2、p53免疫組織化學(xué)染色，計數(shù)各組心肌bcl-2、p53陽性細胞數(shù)，圖像分析處理系統(tǒng)下測定各組bcl-2、p53陽性細胞面積。 結(jié)果：細胞培養(yǎng)研究：(1)心肌細胞缺氧損傷0-6h，細胞活性變化幅度最大，單位時間內(nèi)細胞缺氧損傷程度最大，確定6h為最佳缺氧時間點(2)蕨麻乙醇提取物各劑量組可顯著降低缺

5、氧損傷心肌細胞LDH、CK的外漏量(P＜0.01)；可顯著提高缺氧損傷細胞內(nèi)SOD活性(P＜0.01)，減少MDA的產(chǎn)生(P＜0.05)。(3)蕨麻乙醇提取物(0.024g/ml)可有效減輕缺氧損傷心肌細胞：腫脹變形、胞膜破裂、胞漿空泡化及DNA凝集等損傷變化。(4)蕨麻乙醇提取物(0.024g/ml)可明顯降低缺氧損傷細胞凋亡的百分率(P＜0.05)。(5)蕨麻乙醇提取物可顯著上凋缺氧損傷心肌細胞內(nèi)bcl-2蛋白的表達(P＜0.01)

6、，降低p53蛋白的表達(P＜0.01)。 動物實驗研究：(1)給予蕨麻乙醇提取物5g/kg，可顯著降低慢性缺氧損傷小鼠血清中LDH活性(P＜0.01)、CK活性(P＜0.05)，提高SOD活力(P＜0.05)，減少MDA的產(chǎn)生(P＜0.01)；而給予蕨麻乙醇提取物2.5g/kg，小鼠血清中心肌酶活性、SOD活力及MDA含量，與慢性缺氧模型組比較均無顯著性差異(P＞0.05)。(2)給予蕨麻乙醇提取物5g/kg，可有效減輕心肌組織

7、缺氧損傷程度，而給予蕨麻乙醇提取物2.5g/kg無明顯作用。(3)5g/kg蕨麻乙醇提取物可顯著上調(diào)慢性缺氧損傷小鼠心肌bcl-2蛋白的表達(P＜0.05)，降低p53蛋白的表達(P＜0.05)；而2.5g/kg組與慢性缺氧模型組比較，差別均無顯著性(P＞0.05)。 結(jié)論：蕨麻乙醇提取物能夠顯著減輕缺氧對體外培養(yǎng)大鼠乳鼠心肌細胞的損傷，減輕慢性缺氧對小鼠心肌的損傷，使細胞、心肌組織的結(jié)構(gòu)和功能基本恢復(fù)正常。這種保護作用的機制可