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文檔簡(jiǎn)介
1、黃褐斑是一種臨床常見(jiàn)的色素沉著性皮膚病,多見(jiàn)于東方的中、青年女性,不僅影響容貌,還給患者帶來(lái)諸多心理、生活方面的煩惱和痛苦。因其發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明,目前的治療仍是困擾皮膚科醫(yī)生的難題之一。山柰素是近年來(lái)從多種植物中提純出的天然中藥單體,具有多種生物活性,如抗菌劑抗炎等作用。此外,我們先期的研究發(fā)現(xiàn),山柰素對(duì)體外不同狀態(tài)的的酪氨酸酶活性都有明顯的抑制作用,呈時(shí)效和量效的關(guān)系,在培養(yǎng)的人正常黑素細(xì)胞中,隨著山柰素濃度的升高,對(duì)酪氨酸酶及黑
2、素合成的抑制逐漸增強(qiáng),且對(duì)黑素合成抑制作用比國(guó)際公認(rèn)的熊果苷要強(qiáng)(P<0.05)。山柰素雖然表現(xiàn)出對(duì)黑素細(xì)胞酪氨酸酶活性的抑制作用,但對(duì)其增值卻無(wú)明顯的抑制作用,1M時(shí)對(duì)細(xì)胞增殖出現(xiàn)了促進(jìn)作用,而且發(fā)現(xiàn),隨著山柰素濃度增高及作用時(shí)間的延長(zhǎng),黑素細(xì)胞的樹(shù)突有多極向兩極轉(zhuǎn)化的趨勢(shì)明顯,由此我們推測(cè)山柰素是一種細(xì)胞毒性小,應(yīng)用前景良好的酪氨酸酶抑制劑。山柰素的這一特性也是首次發(fā)現(xiàn),以“一種山柰素的新制藥用途”申請(qǐng)的國(guó)家發(fā)明專(zhuān)利于2012年被國(guó)
3、家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予,為進(jìn)一步驗(yàn)證其作用的效果,我們將山柰素外用于黑色小鼠的皮膚,觀(guān)察山柰素對(duì)黑色小鼠皮膚黑素合成的影響,為進(jìn)一步的臨床應(yīng)用和產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。
目的:通過(guò)對(duì)黑色小鼠皮膚外用不同濃度的山柰素,一方面學(xué)習(xí)掌握小鼠的飼養(yǎng)方法和外用藥膏的制作方法,另一方面更重要的是觀(guān)察山奈素對(duì)黑素小鼠皮膚色素的影響,以驗(yàn)證山柰素在動(dòng)物模型的作用效果和安全性,為其進(jìn)一步的臨床應(yīng)用和產(chǎn)品開(kāi)發(fā)打基礎(chǔ)。
方法:將60只C57BL黑色小
4、鼠隨機(jī)的分為六組,每組10只。將四種濃度KPF軟膏、只含基質(zhì)的軟膏分別涂抹于小鼠背部約1.5cm×1.5cm大小的區(qū)域,剩下10只小鼠不涂抹任何藥膏,共8周。用藥結(jié)束1周后取小鼠受試皮膚,制作病理切片:1、根據(jù)色素脫失評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)目測(cè)小鼠皮膚色素脫失情況并統(tǒng)計(jì);2、用蘇木精伊紅染色法和免疫組織化學(xué)染色法染色,觀(guān)察黑素細(xì)胞形態(tài)并統(tǒng)計(jì)黑素細(xì)胞數(shù)量;3、用Modified Lillie's染色法染色,觀(guān)察并統(tǒng)計(jì)黑素顆粒數(shù)量及其才表皮各層分布情況。
5、對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料如數(shù)據(jù)為正態(tài)分布且方差齊,采用方差分析;如非正態(tài)和或方差不齊,采用非參數(shù)的秩和檢驗(yàn),并以P<0.05作為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的判斷標(biāo)準(zhǔn)。
結(jié)果:1、小鼠皮膚受山柰素的影響而產(chǎn)生色素脫失,X2=47.012,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);僅在山柰素濃度為15%時(shí)色素脫失明顯,呈現(xiàn)均勻分布的色素脫失,其它濃度影響不明顯;2、小鼠表皮黑素細(xì)胞的含量并沒(méi)有受到山柰素的明顯影
6、響,F(xiàn)=0.751,差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);3、小鼠表皮黑素顆粒的含量受山柰素的影響而降低,F(xiàn)=416.923,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在5%和15%的濃度下降低的作用明顯,其他濃度影響不明顯;4、小鼠表皮黑素顆粒分布在山柰素的作用下評(píng)分等級(jí)降低,X2=81.312,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),僅在濃度為5%和15%時(shí)作用明顯,其它濃度作用不明顯。
結(jié)論:1、山柰素可升高皮膚色素脫失等級(jí),隨著山柰素
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