中藥對(duì)黑素合成及其相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的:本研究用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)方法對(duì)文獻(xiàn)記載的治療白癜風(fēng)的中藥進(jìn)行發(fā)掘。從色素生成的關(guān)鍵酶——酪氨酸酶入手，用離體酶學(xué)方法從常用于治療白癜風(fēng)的中藥中篩選出對(duì)酪氨酸酶有激活作用的中藥，并對(duì)所篩選出的藥物進(jìn)行致色素作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，以找出在活體中能促進(jìn)皮膚色素生成和黑色素細(xì)胞增生的中藥，又以培養(yǎng)的小鼠B16黑色素瘤細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，觀察在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中增強(qiáng)黑色素生成的中藥對(duì)黑色素細(xì)胞的細(xì)胞增殖、黑色素合成和酪氨酸酶活性的影響。再通過中藥對(duì)酪氨酸酶蛋白

2、表達(dá)、酪氨酸酶及相關(guān)蛋白基因表達(dá)的影響，進(jìn)一步研究中藥致色素作用的機(jī)理。這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可提供臨床治療時(shí)優(yōu)選用藥的依據(jù)，通過對(duì)提取物中有效成分的研究還有可能從中藥中開發(fā)出增強(qiáng)黑色素生成的新藥，在將來用于白癜風(fēng)的治療。 材料和方法:棕黃色豚鼠選自大連醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物室，小鼠B16黑素瘤細(xì)胞由中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞研究所提供。本研究基于體外氧化蘑菇酪氨酸酶測(cè)定酶活性和酶動(dòng)力學(xué)，結(jié)合組織化學(xué)方法，采用組織切片HE染色，觀察組織學(xué)變化，Lilli

3、e氏改良鐵反應(yīng)法，計(jì)數(shù)黑素細(xì)胞顆粒，及Dopa-氧化酶染色，計(jì)算每100個(gè)基底細(xì)胞中Dopa陽性細(xì)胞數(shù)。通過培養(yǎng)的B16黑素瘤細(xì)胞用MTT法測(cè)定細(xì)胞的增殖活性，氧化L-Dopa法測(cè)定細(xì)胞酪氨酸酶活力，NAOH法測(cè)定黑素生成量，免疫組織化學(xué)方法測(cè)定酪氨酸酶蛋白的表達(dá)量，以及采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)測(cè)定黑素合成相關(guān)基因表達(dá)的影響。 結(jié)論一.臨床常用于治療白癜風(fēng)的中藥近半數(shù)在體外對(duì)黑色素生成的關(guān)鍵酶-酪氨酸酶有激活作用，提示可能是中

4、藥治療白癜風(fēng)的一種作用機(jī)制。 二.多種中藥乙醇提取物對(duì)酪氨酸酶激活的酶動(dòng)力學(xué)型類不同于已知黑色素生成促進(jìn)劑補(bǔ)骨脂素，提示其含有與補(bǔ)骨脂素不同的有效成分，具有開發(fā)前景。三.酶學(xué)實(shí)驗(yàn)中顯示對(duì)酪氨酸酶有激活作用的中藥大多能增強(qiáng)棕色豚鼠皮膚的黑色素生成，說明酶學(xué)篩選是有意義的，但不能代替活體實(shí)驗(yàn)。 3四.在離體實(shí)驗(yàn)?zāi)茉黾永野彼崦富钚院驮诨铙w實(shí)驗(yàn)?zāi)茉鰪?qiáng)黑色素生成的中藥可選用于白癜風(fēng)的臨床治療。 五.旱蓮草等6種中藥能增強(qiáng)B

5、16黑色素瘤細(xì)胞黑色素生成，對(duì)細(xì)胞增殖、黑色素含量和酪氨酸酶活性均有作用。鑒于B16細(xì)胞在黑色素生成的研究領(lǐng)域中具有替代人類黑色素細(xì)胞的價(jià)值，上述中藥的臨床應(yīng)用價(jià)值和開發(fā)前景更值得重視。 六.旱蓮草等3種中藥能增加酪氨酸酶蛋白在B16細(xì)胞中的表達(dá)，說明其可能通過增加酶蛋白的表達(dá)量來促進(jìn)黑素合成。RT-PCR結(jié)果顯示旱蓮草等4種中藥能上調(diào)酪氨酸酶的mRNA，苦參能上調(diào)TPR-2的mRNA，說明它們的作用機(jī)制在調(diào)節(jié)黑色素生成相關(guān)基因