葆菁口服液對黑素合成及黑素小體轉(zhuǎn)運的影響及機制.pdf

1、實驗?zāi)康模?br>　　本課題運用血清藥理學方法，觀察葆菁口服液含藥血清對體外培養(yǎng)人正常黑素細胞體系中黑素合成，及其對黑素細胞與角質(zhì)形成細胞共培養(yǎng)體系中黑素小體轉(zhuǎn)運的影響，并探討其作用機制，為葆菁口服液改善黃褐斑癥狀提供理論依據(jù)。
　　實驗方法：
　　血清藥理學方法制備中藥含藥血清。建立人正常黑素細胞體外培養(yǎng)體系，分別采用MTT比色法、酪氨酸酶多速率氧化法、NaOH裂解法測定黑素細胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素含量，RT-PCR測

2、定酪氨酸酶mRNA表達量;建立體外黑素細胞與角質(zhì)形成細胞共培養(yǎng)體系，pull-down法檢測黑素細胞RhoA及Racl蛋白的表達情況、應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測黑素小體轉(zhuǎn)運的情況。以維生素C作為對照組。應(yīng)用SPSS16.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。
　　實驗結(jié)果：
　　1、 MTT法測定黑素細胞增殖，與生理鹽水組相比較，葆菁口服液組、維生素C組對黑素細胞的增殖的影響無明顯差異，組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。NaOH裂解法

3、測定黑素含量，與生理鹽水組比較，葆菁口服液、維生素C含藥血清可降低黑素合成量，兩組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。多巴氧化法對酪氨酸酶活性進行測定，與生理鹽水組比較，葆菁口服液組與維生素C組黑素細胞中黑素合成含量均降低，且差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);葆菁口服液組與維生素C組黑素細胞中黑素合成含量相當，組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。PCR測定酪氨酸酶mRNA，三組之間酪氨酸酶mRNA的表達量差異不明顯，組間差異無統(tǒng)

4、計學意義(P＞0.05)。
　　2、 pull-down法測定RhoA、Rac1蛋白的表達，與生理鹽水組比較，葆菁口服液組可上調(diào)RhoA蛋白的表達，維生素C組可下調(diào)RhoA蛋白的表達，與生理鹽水組比較均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。葆菁口服液組及維生素組均可下調(diào)Rac1蛋白的表達，與生理鹽水組對比，差異有統(tǒng)計學意義;且葆菁口服液的下調(diào)作用更為明顯，較維生素C組差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。流式測定黑素轉(zhuǎn)運結(jié)果顯示，葆菁口服

5、液組、維生素C組處理后，黑素小體的轉(zhuǎn)運率降低，分別為10.32％、20.09％，較生理鹽水組29.43％有明顯下降，以葆菁口服液組最為顯著。
　　結(jié)論：
　　葆菁口服液含藥血清可抑制黑素細胞中酪氨酸酶的活性，減少黑素的合成，同時上調(diào)RhoA蛋白的表達水平，并下調(diào)Rac1蛋白的表達，抑制黑素細胞樹突的生長，從而減少黑素向角質(zhì)形成細胞的轉(zhuǎn)運。與維生素C比較，二者對黑素合成的抑制作用相當。雖然二者對及Rac1蛋白的表達均有抑制作用