神經(jīng)生長因子、還原型谷胱甘肽對Melan-A細(xì)胞的黑素合成、增殖及凋亡的影響.pdf

1、目的
　　白癜風(fēng)是一種常見的病因不明的獲得性色素脫失性疾病，臨床上表現(xiàn)為與黑素細(xì)胞選擇性破壞相關(guān)的皮膚黏膜白斑及毛發(fā)變白。就其病因及發(fā)病機理提出各種學(xué)說，但目前仍沒有明確定論。無論如何，現(xiàn)有的組織學(xué)，實驗室數(shù)據(jù)都支持凋亡，而非壞死是黑素細(xì)胞死亡的方式。
　　神經(jīng)營養(yǎng)因子(NTs)屬于一組結(jié)構(gòu)與功能上相關(guān)的分子家族，包括NGF、BDNF、NT-3、NT-4/-5，其功能主要為促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞存活與細(xì)胞分化或死亡。其中被發(fā)現(xiàn)最早、最

2、典型、研究最多的就是神經(jīng)生長因子(NGF)。已有許多研究發(fā)現(xiàn)NGF關(guān)系到神經(jīng)細(xì)胞以及其他多種細(xì)胞存活、分化或死亡。
　　還原型谷胱甘肽(GSH)是一種重要的生物抗氧化劑，對細(xì)胞有多種生化作用。GSH能夠與多種化學(xué)物質(zhì)及其代謝物結(jié)合，清除體內(nèi)氧離子及其他自由基，具有保護(hù)細(xì)胞膜促進(jìn)酶活性抗氧化解毒等作用。許多細(xì)胞學(xué)實驗發(fā)現(xiàn)，GSH對神經(jīng)細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用。
　　同為神經(jīng)嵴來源的黑素細(xì)胞與神經(jīng)細(xì)胞無論在結(jié)構(gòu)還是功能上，有著很多共

3、性。既然NGF與GSH對神經(jīng)細(xì)胞凋亡有作用，國內(nèi)外又罕見NGF與GSH對黑素細(xì)胞影響的報道，本實驗擬研究神經(jīng)生長因子對黑素細(xì)胞黑素合成、增殖及凋亡的作用。
　　方法
　　取Melan-A細(xì)胞，分為空白對照組、NGF組、GSH組。NGF組分為4小組，分別給予250μg/L、50μg/L、10μg/L和2μg/L的NGF溶液48h。GSH組分為4小組，分別給予2mmol/L，400μmol/L，80μmol/L和16μmol/L

4、的GSH溶液48h。采用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、MTT法檢測細(xì)胞增殖活性、NaOH裂解法測黑素合成量、體外氧化DOPA反應(yīng)方法測酪氨酸酶活性。
　　另取Melan-A細(xì)胞，分為空白對照組、UVA組、UVA+NGF組、UVA+GSH組。UVA組給予6J/cm2UVA照射后培養(yǎng)48h;UVA+NGF組給予6J/cm2UVA照射后給予250μg/L的NGF溶液48h;UVA+GSH組給予6J/cm2UVA照射后給予1mmol/L的G

5、SH溶液48h。采用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、MTT法檢測細(xì)胞增殖活性、Annexin-Ⅴ/PI流式雙染法測凋亡情況。
　　結(jié)果
　　根據(jù)倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、MTT法、NaOH裂解法、體外氧化DOPA反應(yīng)方法結(jié)果，與空白對照組相比，各濃度NGF組與GSH組Melan-A細(xì)胞的形態(tài)、增殖、黑素合成和酪氨酸酶活性無顯著差別。
　　形態(tài)學(xué)觀察、MTT法和Annexin-Ⅴ/PI流式雙染法結(jié)果顯示，與空白對照組相比，

6、UVA組、UVA+NGF組增殖率顯著下降，凋亡率顯著增加，但UVA+NGF組與UVA組無顯著差別。與空白對照組相比，UVA組、UVA+GSH組增殖率顯著下降，凋亡率顯著增加，且UVA+GSH組增殖率與凋亡率在空白對照組與UVA照射組之間。
　　結(jié)論
　　一定劑量范圍內(nèi)，UVA照射組，隨著照射劑量增加、照射后時間延長，Melan-A細(xì)胞增殖率顯著下降，凋亡率顯著增加。
　　NGF對Melan-A細(xì)胞的黑素合成、增殖及凋亡