填飼對鵝肝膽固醇合成相關基因表達的影響.pdf

1、鵝肥肝是世界三大美食之一。填飼是獲得鵝肥肝的重要技術手段。經過填飼后，鵝肝中含有大量對人體健康有益的不飽和脂肪酸、卵磷脂、微量元素等，具有較高的經濟價值。以往的研究多關注于肝臟脂肪酸的研究，而關于膽固醇方面的文獻報道甚少，也沒有關于填飼對鵝肝臟膽固醇含量影響的報道。HMGCS1基因參與調控HMG-CoA合成酶的生成，該酶是肝臟膽固醇生物合成中的關鍵酶，其功能是將乙酰CoA和乙酰乙酰CoA縮合為HMG-CoA。該基因與膽固醇的合成密切相關

2、。
　　本試驗旨在獲得鵝HMGCS1基因的cDNA序列，觀察該基因與填飼鵝肝臟生成膽固醇的相關性。運用RACE方法擴增目的基因的cDNA序列，進行生物信息學分析。對填飼鵝進行形態(tài)學觀察和組織切片觀察，同時對朗德鵝的體重、肝重、肝重指數(shù)等屠宰性狀進行統(tǒng)計分析。并選用膽固醇試劑盒測定鵝肝中膽固醇的含量。在分子生物技術方面，利用熒光定量PCR技術檢測并分析HMGCS1基因在各組織中mRNA的表達，同時比較填飼后各組織HMGCS1基因表達

3、的變化。在體外試驗方面，通過對半原位灌注法的改進，分離培養(yǎng)鵝肝細胞，觀察細胞動態(tài)變化，探究各類脂肪酸、葡萄糖和胰島素對鵝肝細胞脂肪沉積的影響。研究結果如下:
　　1.本試驗成功克隆了HMGCS1基因，獲得其mRNA序列，2947 bp，其中開放閱讀框包含了1569個堿基，編碼522個氨基酸，基因序列已提交GenBank，登錄號為KF425515。該基因在進化過程中高度保守，序列與鴨最為接近，并屬于同一支系。
　　2.熒光定量

4、結果顯示HMGCS1基因特異性的在肝臟中表達，其他組織表達較低(P＜0.01)。試驗結果表明，朗德鵝填飼高能日糧后該基因的表達顯著下降(P＜0.01)，推測該基因與膽固醇的合成有關。該結果可用于填飼鵝的育種和鵝肥肝的生產。
　　3.填飼后朗德鵝的體重、肝重、肝重指數(shù)與對照組相比均顯著增加(P＜0.05)，并且形成明顯的脂肪肝，肝細胞有明顯腫大和脂肪沉積，但均未出現(xiàn)炎癥反應。另外，試驗發(fā)現(xiàn)朗德鵝血清中膽固醇含量雖有極顯著升高(P＜0

5、.01)，但是肝臟中膽固醇含量卻極顯著降低(P＜0.01)。
　　4.利用改良后的半原位灌注法成功分離培養(yǎng)了活性較高的鵝原代肝實質細胞。原代肝細胞在24孔板中生長良好，48 h至72 h為細胞處理的最佳時間段。隨著鵝肝細胞的增殖，細胞內的脂滴數(shù)量會逐漸增多，預示著鵝肝細胞本身的脂肪代謝能力較強，間接佐證了鵝填飼效率高的原因。同時，不飽和脂肪酸以及胰島素在一定濃度下可以促進肝細胞中脂肪的合成。多不飽和脂肪酸在一定濃度下也會促進HMG