鵝FAS、THRSPa和Apo-Al基因多態(tài)性及FAS和Apo-B基因在填飼鵝中表達(dá)模式的研究.pdf

1、FAS、OBR、THRSPα、Apo-AI和Apo-B基因已被證實(shí)是重要的脂類(lèi)代謝候選基因，在脂肪合成代謝與貯存、脂肪沉積、膽固醇運(yùn)輸和調(diào)節(jié)機(jī)體能量平衡等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。為了檢測(cè)FAS、OBR、THRSPα和Apo-AI基因的突變位點(diǎn)，尋找可以用于鵝分子育種的潛在的分子遺傳標(biāo)記，本研究以朗德鵝、浙東白鵝、江山白鵝、永康灰鵝和萊茵鵝共132只個(gè)體為研究對(duì)象，通過(guò)直接電泳與測(cè)序相結(jié)合的方法檢測(cè)這四個(gè)基因部分片段的多態(tài)性，對(duì)于存在多個(gè)突變

2、位點(diǎn)的片段，用SAS軟件構(gòu)建單倍型，并與鵝的屠體性狀、肌肉脂肪酸成分、粗脂肪含量和體尺性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析.另一方面，為了明確強(qiáng)制填飼對(duì)FAS和Apo-B基因在朗德鵝各組織中表達(dá)的影響，探索基因表達(dá)與脂肪沉積的關(guān)系，以β-actin作為內(nèi)參基因，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)對(duì)照鵝與填肥鵝13個(gè)組織中FAS和Apo-B基因mRNA表達(dá)水平，比較兩組鵝各組織中基因表達(dá)的差異，并分析其與終點(diǎn)體重、腹脂重、腹脂率、肝重及肝臟指數(shù)間的相關(guān)關(guān)系.此外，為

3、了明確上述五個(gè)鵝種的肉質(zhì)特點(diǎn)，為其配套系選育和開(kāi)發(fā)利用提供可靠依據(jù)，本試驗(yàn)比較了不同品種肌間脂肪及其17項(xiàng)脂肪酸組成和腹脂沉積情況的差異，并對(duì)17項(xiàng)脂肪酸組成指標(biāo)進(jìn)行主成分分析和系統(tǒng)聚類(lèi)分析。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.鵝FAS、OBR、THRSPα和Apo-AI基因多態(tài)性與屠體、脂肪酸相對(duì)含量、粗脂肪及體尺性狀相關(guān)性研究
　　 本試驗(yàn)中，除了Apo-AI基因所擴(kuò)增出的片段中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)SNPs，其它三個(gè)基因中檢測(cè)到的SN

4、Ps分別為:SNPs-FAS551(C/T)、SNPs-FAS681(C/T)、SNPs-OBR3460(C/T)、SNPs-OBR3575(A/G)和SNPs-THRSPα649(C/T).其中，OBR3575位點(diǎn) A/G突變?yōu)殄e(cuò)義突變，導(dǎo)致異亮氨酸變?yōu)槔i氨酸。除了SNPs-FAS681只產(chǎn)生cc和ct兩種基因型，其它突變均產(chǎn)生三種基因型，但是各個(gè)位點(diǎn)的基因型分布及頻率在不同品種間均表現(xiàn)出各自的特點(diǎn).在檢測(cè)到有SNPs存在的群體中，除

5、了SNPs-FAS681位點(diǎn)在ZD群體中的PIC小于0.25，為低度多態(tài)，其它位點(diǎn)在各個(gè)群體中均屬于中度多態(tài)。而且，只有江山白鵝在SNP-OBR3460和SNP-OBR3575兩個(gè)位點(diǎn)上極顯著偏離了Hardy-Weinberg平衡，它在其它多態(tài)位點(diǎn)以及其它鵝群在各多態(tài)位點(diǎn)均處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)。利用FAS中的2個(gè)SPNs構(gòu)建出CC、CT、TC和TT四種單倍型，利用OBR的2個(gè)SNPs構(gòu)建出CA、CG、TA和TG四種單

6、倍型，且根據(jù)對(duì)連鎖不平衡參數(shù)的估計(jì)，OBR的兩個(gè)位點(diǎn)處于強(qiáng)連鎖不平衡狀態(tài)。
　　 關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明:SNPs-FAS551位點(diǎn)的基因型效應(yīng)對(duì)粗脂肪的影響極顯著(P＜0.01)，對(duì)全凈膛率影響顯著(P＜0.05)，對(duì)腹脂率有一定影響（P＜0.1）;SNPs-681的不同基因型對(duì)腹脂率有極顯著影響（P＜0.01），對(duì)豆蔻酸有顯著影響P＜0.05）;二者的單倍型效應(yīng)對(duì)腹脂率有顯著影響（P＜0.05），對(duì)鵝肉的脂肪酸成分、粗脂肪含量及鵝

7、的體尺性狀無(wú)明顯影響。
　　 對(duì)于OBR基因，SNPs-OBR3460位點(diǎn)的基因型效應(yīng)對(duì)花生酸和二十碳烯酸的相對(duì)含量影響顯著(P＜0.05); SNP-OBR3575的基因型對(duì)十七碳烯酸和粗脂肪含量有顯著影響(P＜0.05);該基因兩個(gè)突變位點(diǎn)的基因型效應(yīng)及其單倍型效應(yīng)對(duì)所有屠體性狀和體尺性狀均無(wú)顯著影響。
　　 而在THRSPα基因，SNPs-THRSPα649的基因型效應(yīng)對(duì)豆蔻酸相對(duì)含量影響極顯著（P＜0.01）;對(duì)

8、亞油酸、ω6∶ω3值和龍骨長(zhǎng)影響顯著（P＜0.05），并對(duì)半凈膛率、飽和脂肪酸和芥酸的相對(duì)含量有一定影響（P＜0.1）。
　　 2.熒光定量PCR法檢測(cè)朗德鵝填飼前后FAS和Apo-B基因表達(dá)情況
　　 FAS與Apo-B基因在朗德鵝13個(gè)組織中均有不同程度的表達(dá)。經(jīng)填肥處理，F(xiàn)AS基因在鵝肝臟和脾中的表達(dá)量顯著增加（P＜0.05），在腎臟中的表達(dá)水平顯著降低(P＜0.05)，而Apo-B基因在腦和胸肌中的表達(dá)水平顯著升

9、高（P＜0.05），在皮脂、小腸、脾和胰腺中的表達(dá)量顯著降低（P＜0.05）。FAS基因在朗德鵝心臟、肝臟、小腸、皮脂和脾中的相對(duì)表達(dá)量，以及Apo-B基因在小腸、肺和脾中的表達(dá)水平與朗德鵝部分生長(zhǎng)參數(shù)顯著或極顯著相關(guān)。
　　 3.5個(gè)鵝種肌肉脂肪酸成分比較及主成分分析結(jié)果
　　 在五個(gè)鵝種中，江山白鵝的飽和脂肪酸相對(duì)含量(31.10％)、萊茵鵝的不飽和脂肪酸相對(duì)含量(69.46％)、浙東白鵝的必需脂肪酸相對(duì)含量(15.

10、27％)最高，分別與其它鵝種間存在不同顯著水平的差異;江山白鵝的ω3(3.16％)、浙東白鵝的ω6(12.96％)和ω7(5.28％)、萊茵鵝的ω9(49.79％)相對(duì)含量最高，均極顯著高于其它鵝種(P＜0.01);浙東白鵝ω6∶ω3值(5.63)最高，江山白鵝的(3.78)最低，各鵝種間的差異極顯著(P＜0.01);浙東白鵝的粗脂肪含量(3.72％)最高，極顯著高于江山白鵝和萊茵鵝(P＜0.01)，顯著高于永康灰鵝（P＜0.05）;永

11、康灰鵝的腹脂率(3.47％)最高，江山白鵝的最低(0.55％)，二者與其它鵝種間均呈極顯著差異（P＜0.01）;各族不飽和脂肪酸相對(duì)含量與粗脂肪、腹脂率之間呈不同程度的相關(guān)，17項(xiàng)脂肪酸組成指標(biāo)間也存在不同程度的相關(guān)，其中以油酸與亞油酸的相關(guān)性最高;主成分分析獲得的前3個(gè)主成分分別解釋總變異的46.89％、30.01％和13.27％，累積貢獻(xiàn)率達(dá)到90.17％;浙東白鵝的綜合主成分值排名第一;聚類(lèi)結(jié)果表明，5個(gè)鵝種聚為3類(lèi)，浙東白鵝與萊