FAS-FASL基因多態(tài)性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)性研究.pdf

1、目的：復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(recurrentspontaneousabortion,RSA)被定義為連續(xù)發(fā)生3次或3次以上自然流產(chǎn)。RSA大多數(shù)為早期流產(chǎn)，少數(shù)為晚期流產(chǎn)。RSA是婦產(chǎn)科臨床常見(jiàn)病,它對(duì)孕產(chǎn)婦的身心產(chǎn)生不良的影響,對(duì)臨床工作者更是一種嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，因此對(duì)其病因及發(fā)病機(jī)制的研究有極其重要的意義。細(xì)胞凋亡,是母體蛻膜重構(gòu)、調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層入侵和保持母胎免疫耐受平衡所必須的生理過(guò)程。FAS/FASL系統(tǒng)是細(xì)胞凋亡最重要的誘導(dǎo)物，激活這個(gè)復(fù)合體

2、對(duì)胚胎植入、滋養(yǎng)層細(xì)胞的發(fā)育和入侵至關(guān)重要,同時(shí)也保護(hù)滋養(yǎng)層細(xì)胞免受母體的免疫攻擊系統(tǒng)。改變FAS/FASL基因的表達(dá)可能導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的改變，并最終影響免疫應(yīng)答和胚胎植入，導(dǎo)致復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生。
　　在FAS/FASL基因的啟動(dòng)子區(qū)域已確定單核苷酸多態(tài)性（singlenu-cleotidepolymorphism，SNP）。FAS基因-1377G/A（rs2234767）和-670A/G(rs1800682)與FASL基因-844

3、T/C(rs763110)這三個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)均位于基因啟動(dòng)子區(qū)，它們可通過(guò)改變基因轉(zhuǎn)錄活性而影響蛋白的表達(dá)，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡出現(xiàn)異常。國(guó)外研究表明了FAS/FASL基因多態(tài)性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的相關(guān)性。然而,據(jù)我們所知,這些遺傳變異尚未在國(guó)內(nèi)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)女性中進(jìn)行評(píng)估。
　　本研究從遺傳學(xué)的角度出發(fā),運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)-多重SNaPshotSNP分型技術(shù)檢測(cè)RSA患者的這三個(gè)基因啟動(dòng)子多態(tài)性位點(diǎn)與RSA的相關(guān)性,在分子水平上探討RSA

4、可能的發(fā)病機(jī)制,為臨床工作者提供一定的理論依據(jù)。識(shí)別與RSA風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的基因多態(tài)性，很可能成為識(shí)別高危孕婦的一個(gè)有用工具，以期在臨床上對(duì)RSA患者開(kāi)展預(yù)防性干預(yù)和治療。
　　方法：
　　1、本研究采用病例-對(duì)照研究方法，收集99例復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者和100例對(duì)照組女性的靜脈抗凝血5ml，采用蛋白酶K消化-飽和氯化鈉鹽析法提取基因組DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)-多重SNaPshotSNP分型技術(shù)檢測(cè)FAS基因位點(diǎn)-1377G/A、-67

5、0A/G和FASL基因位點(diǎn)-844T/C3個(gè)多態(tài)位點(diǎn)的基因型頻率分布。
　　2、本研究所有數(shù)據(jù)分析運(yùn)用SPSS13.0版軟件進(jìn)行。采用基因計(jì)數(shù)法計(jì)算病例組和對(duì)照組的基因型和等位基因頻率；計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，比較采用t檢驗(yàn)；基因型頻率的預(yù)期值與觀察值采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行比較，并進(jìn)行哈迪-溫伯格平衡(Hardy-Weinbergeguiliberum)法則分析。等位基因、基因型頻率在病例組和對(duì)照組的分布采用行×列表的χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比

6、較。計(jì)算相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度的優(yōu)勢(shì)比(oddsratio，OR)及其95％可信區(qū)間（confidenceinterval，CI)。所有數(shù)據(jù)檢測(cè)均取雙尾值，以P<0.05作為差異具有顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果：
　　1、選擇的FAS/FASL基因3個(gè)SNP基因型分布：對(duì)照組FAS基因-1377G/A，-670A/G與FASL基因-844T/C這3個(gè)SNP基因型頻率的分布均符合哈迪-溫伯格平衡(Hardy-Weinbergeguiliber

7、um)法則（P值均＞0.05）；
　　2、FAS基因-1377G/A（rs2234767）SNP等位基因和基因型頻率比較：FAS基因-1377G/ASNP在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組及對(duì)照組的G和A等位基因頻率分別為63.1%、36.9%和74.0%、26.0%，兩組相比有顯著性差異（P<0.05）。GG、GA、AA這3種基因型的頻率分別為37.4%、51.5%、11.1%和51.0%、46.0%、3.0%。FAS-1377G/A的A等位基因的

8、頻率復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組(0.37)明顯高于對(duì)照組(0.26)且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.020,Table1)，A等位基因使復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加(OR=1.66，95%CI=1.08-2.55）。以GG基因型作為參考，AA基因型頻率在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組(11.1%)明顯高于對(duì)照組(3.0%)且使復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)明顯增加(OR=5.05，95%CI=1.32-19.40）；
　　3、FAS基因-670A/G(rs1800682)SNP等

9、位基因和基因型頻率比較：FAS基因-670A/GSNPA和G等位基因頻率在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組和對(duì)照組分別為68.2%、31.8%和66.0%、34.0%，兩組相比無(wú)顯著差異（P>0.05）；AA、AG、GG3種基因型頻率分布在RSA（43.4%、49.5%、7.1%）和對(duì)照組（43.0%、49.0%、8.0%）間也無(wú)顯著差異（P>0.05）；以AA基因型作參考，AG或GG基因型未明顯改變復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.97，95%CI=0.5

10、5-1.69）；
　　4、FASL基因-844T/C(rs763110)SNP等位基因和基因型頻率比較：FASL基因-844T/CSNPC和T等位基因頻率在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組和對(duì)照組分別為72.2%、27.8%和73.5%、26.5%，兩組間無(wú)顯著差異（P>0.05）；CC、CT、TT3種基因型頻率分布在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組與對(duì)照組分別為50.5%、43.4%、6.1%和50.0%、47.0%、3.0%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。以CC

11、基因型作為參考，CT或TT基因型未顯著改變復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.07，95%CI=0.69-1.66)；
　　5、FAS/FASL各位點(diǎn)組合基因型比較：為了研究基因型-基因型交互作用,本研究對(duì)FAS-1377和FAS?670、FAS-1377和FASL-844、FAS-670和FASL-844基因型的各9個(gè)組合共計(jì)27個(gè)組合進(jìn)行了評(píng)估。其中FAS-670AG/FASL-844CC組合基因型(OR=2.6，95%CI=1.

12、10-61.03）使得復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。FAS-670AA/FASL-844CT組合基因型(OR=2.6，95%CI=1.06-6.26）也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示了它在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)中的角色(Table2、Table3、Table4)。
　　結(jié)論：
　　1、FAS-1377G/A單核苷酸多態(tài)性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān),FAS-1377基因位點(diǎn)的A等位基因是復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的重要遺傳危險(xiǎn)因素,顯著增加了復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)病