鵝MC4R、LPL、ApoB和PPARγ基因多態(tài)性及MC4R基因在填飼鵝中表達(dá)模式的研究.pdf

1、本研究以朗德鵝、江山白鵝、浙東白鵝、永康灰鵝和萊茵鵝五個(gè)鵝種共132只個(gè)體為供試群體,針對(duì)MC4R、LPL、PPARγ和ApoB基因在其他動(dòng)物中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的多態(tài)位點(diǎn),設(shè)計(jì)引物,利用PCR-SSCP技術(shù),在群體內(nèi)研究了上述基因在各個(gè)體中的SNPs及其與肉質(zhì)和屠體性狀的關(guān)聯(lián)性.研究結(jié)果對(duì)于闡明鵝肥肝形成機(jī)理、動(dòng)物肥胖機(jī)理、鵝脂類代謝及育種改良等均具有重要意義。另外,還進(jìn)行了朗德鵝填飼前后MC4R基因在各組織中表達(dá)模式的研究。應(yīng)用強(qiáng)制填飼技術(shù)建

2、立腹型肥胖朗德鵝模型,提取填飼后及正常朗德鵝新鮮腹脂、肝臟等13處組織的總RNA,SYBR GreenⅠ熒光定量PCR法檢測(cè)各組織MC4R基因的表達(dá),選擇β-actin作為內(nèi)參基因,使用半定量2-△△CT法分析結(jié)果。結(jié)果顯示如下:
　　 1鵝MC4R、LPL、PPARγ和ApoB基因多態(tài)性與屠體、肉質(zhì)性狀相關(guān)性研究
　　 PCR-SSCP結(jié)果表明,在本實(shí)驗(yàn)所有鵝個(gè)體中,除了PPARγ基因所擴(kuò)增出片段中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)SNPs外,

3、其他基因均發(fā)現(xiàn)SNPs存在。它們分別是:SNPs-MC4R128(G→A)、SNPs-LPLexton3-246(G→A)、SNPs-apoB4507(A→G)。其中,SNPs-MC4R128(G→A)檢測(cè)到兩種基因型AA型和BB型,SNPs-LPLexton3-246(G→A)檢測(cè)到3中基因型HH型、Hh型及hh型,SNPs-apoB4507(A→G)中也檢測(cè)到三種基因型YY型、Yy型及yy型。最小二乘分析和顯著性檢驗(yàn)表明:在屠體性狀

4、方面,SNPs-MC4R128位點(diǎn)BB型的胸肌率和腿肌率均極顯著高于AA型個(gè)體(P<0.01)。SNPs-LPL exton3—246位點(diǎn)hh型個(gè)體胸肌率、屠宰率和活重均極顯著高于HH型個(gè)體(P<0.01)；HH型個(gè)體腹脂率極顯著低于hh型個(gè)體(P<0.01),Hh型腹脂率顯著低于hh型(P<0.05)；SNPs-apoB4507位點(diǎn)YY基因型胸肌率和腿肌率均顯著低于Vy型(P<0.05),且極顯著低于yy基因型個(gè)體(P<0.01)；Y

5、Y、Yy型個(gè)體活重和腹脂率均極顯著低于yy型(P<0.01)；YY型個(gè)體的屠宰率指標(biāo)也同樣極顯著低于yy型(P<0.01)。在肉質(zhì)性狀方面,SNPs-MCAR128位點(diǎn)AA型個(gè)體十五碳烯酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸及二十碳烯酸含量極顯著高于BB型個(gè)體(P<0.01),亞麻酸含量顯著高于BB型個(gè)體(P<0.05),而AA型個(gè)體豆蔻酸、十五烷酸、棕櫚酸、亞油酸、花生四烯酸、山崳酸、芥酸含量極顯著低于BB型個(gè)體的含量(P<0.01)。SNPs-

6、LPL exton3-246多態(tài)位點(diǎn)對(duì)應(yīng)的三種基因型中,HH型和Hh型個(gè)體月桂酸含量極顯著高于hh型個(gè)體(P<0.01)；HH型個(gè)體豆蔻酸含量極顯著高于hh型個(gè)體(P<0.01),而Hh型個(gè)體豆蔻酸含量顯著高于hh型個(gè)體(P<0.05)；HH型個(gè)體十五烷酸、十五碳烯酸含量均極顯著低于hh型個(gè)體(P<0.01)；HH型和Hh型個(gè)體棕櫚酸含量顯著高于hh型(P<0.05),而十七碳烯酸的結(jié)果恰好與棕櫚酸相反；對(duì)于硬脂酸,Hh型個(gè)體含量顯著低

7、于hh型(P<0.05)；對(duì)于油酸,HH型個(gè)體含量顯著低于hh型個(gè)體(P<0.05)；HH型個(gè)體亞麻酸含量極顯著高于hh型(P<0.01),Hh型個(gè)體的含量顯著高于hh型(P<0.05);對(duì)于花生酸,HH型個(gè)體含量極顯著高于hh型個(gè)體含量(P<0.01)；對(duì)于粗脂肪含量來(lái)說(shuō),HH型個(gè)體粗脂肪含量顯著高于hh型個(gè)體(P<0.05)。SNPs-apoB4507多態(tài)位點(diǎn)三種基因型中,YY型個(gè)體月桂酸和花生酸含量均極顯著高于yy型個(gè)體(P<0.

8、01)；YY型個(gè)體豆蔻酸含量顯著高于yy型個(gè)體(P<0.05)；YY型個(gè)體十五烷酸顯著低于yy型個(gè)體含量(P<0.05)；對(duì)于十五碳烯酸,YY型個(gè)體顯著高于Yy型(P<0.05),并且極顯著高于yy型個(gè)體(P<0.01)；對(duì)于棕櫚酸,YY型個(gè)體顯著低于yy型個(gè)體(P<0.05)；YY型個(gè)體棕櫚油酸含量顯著低于Yy和yy型(P<0.05)；對(duì)于硬脂酸,YY和Yy型個(gè)體含量均顯著高于yy型個(gè)體(P<0.05)；對(duì)于亞麻酸,YY型個(gè)體顯著高于

9、Yy型(P<0.05),且極顯著高于yy型(P<0.01)；對(duì)于二十碳烯酸和花生四烯酸,YY型個(gè)體含量顯著低于Yy型(P<0.05),且極顯著低于yy型個(gè)體(P<0.01)；YY型山崳酸含量顯著低于yy型個(gè)體(P<0.05)；而在芥酸含量方面,YY型和Yy型個(gè)體均極顯著低于yy型個(gè)體(P<0.01)。綜上所述,可考慮將MC4R、LPL及ApoB基因作為影響鵝肉質(zhì)和屠體性狀的候選基因。
　　 2 SYBR GreenⅠ熒光定量PC

10、R法檢測(cè)朗德鵝填飼前后MC4R基因表達(dá)情況
　　 PCR結(jié)果顯示,MC4R基因及β-actin在填飼前后朗德鵝心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、肌胃、小腸、胰腺、腦、胸肌、腿肌、腹脂、皮下脂等13種組織中均存在不同程度表達(dá)。SYBR GreenⅠ熒光定量PCR結(jié)果表明:在腎、小腸、心這3個(gè)組織中,填飼后朗德鵝MC4R表達(dá)量均比對(duì)照組中朗德鵝該基因表達(dá)量低,填飼后分別為填飼前表達(dá)量的0.41±1.80、0.65±5.75及0.72±1.