安徽白山羊MC4R、GDF9基因遺傳效應(yīng)分析及IGF-1真核表達(dá)載體構(gòu)建.pdf

1、安徽白山羊是一個(gè)優(yōu)秀的皮肉兼用型地方山羊品種，具有繁殖力高、適應(yīng)性好、抗病力強(qiáng)、產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)等特點(diǎn)。為了充分挖掘和開(kāi)發(fā)其優(yōu)良種質(zhì)特性，本研究成功克隆了安徽白山羊MC4R基因的cDNA，采用PCR-RFLP方法對(duì)MC4R基因和GDF9基因進(jìn)行了多態(tài)性檢測(cè)，分析了其遺傳效應(yīng)，并成功構(gòu)建了山羊IGF-I真核表達(dá)載體。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.MC4R基因的cDNA克隆、序列分析與組織表達(dá)譜分析
　　 以安徽白山羊心臟、肝臟、

2、腎臟等十個(gè)組織樣本為材料，運(yùn)用RT-PCR技術(shù)對(duì)其MC4R基因的cDNA進(jìn)行克隆，并進(jìn)行了組織表達(dá)譜和生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明：克隆獲得山羊MC4R基因全長(zhǎng)2068bp(GenbankNo.：JN580891)，包含999bp的完整CDS編碼區(qū)，共編碼332個(gè)氨基酸；山羊MC4R基因與綿羊同源性最高(96.9％)，其次為牛(93.5％)；MC4R基因在山羊各組織中均表達(dá)，在腎臟組織中最高，在大腸和小腸組織中最低；MC4R蛋白含有7個(gè)跨膜

3、結(jié)構(gòu)、5個(gè)絲氨酸磷酸化位點(diǎn)、4個(gè)蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)和1個(gè)特異蛋白激酶的磷酸化位點(diǎn)；MC4R蛋白空間結(jié)構(gòu)包括7個(gè)α螺旋和5個(gè)β折疊。推斷MC4R基因表達(dá)具有明顯的組織特異性，在進(jìn)化中比較保守，不同動(dòng)物間具有相似的生物學(xué)功能。
　　 2.MC4R基因的PCR-RFLP分析
　　 以178只安徽白山羊血液樣本基因組DNA為材料，采用PCR-RFLP方法，檢測(cè)MC4R基因在安徽白山羊群體中的多態(tài)性，并做了與體長(zhǎng)、體高、胸圍、尻寬等

4、體尺性狀的關(guān)聯(lián)性分析。結(jié)果表明：安徽白山羊群體中存在AA、AB和BB三種基因型；AA基因型頻率最高(0.5899)，BB基因型頻率最低(0.1123)，等位基因A表現(xiàn)為優(yōu)勢(shì)等位基因；MC4R基因多態(tài)位點(diǎn)產(chǎn)生的3種基因型中，AA基因型個(gè)體的體長(zhǎng)要顯著高于基因型BB個(gè)體(P<0.05)；AA基因型個(gè)體的體高、胸圍、尻寬的數(shù)值也最高，但與其它兩種基因型個(gè)體間差異不顯著(P>0.05)；MC4R基因多態(tài)位點(diǎn)在安徽白山羊群體中處于Hardy-We

5、inberg不平衡狀態(tài)。推斷MC4R基因多態(tài)位點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)可以為山羊生產(chǎn)性狀的標(biāo)記輔助選擇提供理論依據(jù)。
　　 3.GDF9基因的PCR-RFLP分析
　　 以178只安徽白山羊母羊的血液基因組DNA為材料，采用PCR-RFLP方法檢測(cè)GDF9基因在安徽白山羊群體中的多態(tài)性，但未能檢測(cè)到GDF9基因的FecGH突變(C→T)，推斷該群體均為野生型。
　　 4.山羊IGF-I真核表達(dá)載體構(gòu)建
　　 以安徽白山羊

6、肝臟組織樣本為材料，采用Trizol法和RT-PCR技術(shù)，獲得IGF-I的基因片段，并通過(guò)基因重組技術(shù)將其插入真核表達(dá)載體pEGFP-N1中，構(gòu)建pEGFP-N1-IGF-I真核表達(dá)載體。并通過(guò)PCR擴(kuò)增、酶切結(jié)果電泳分析和測(cè)序的方法對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行鑒定，表明已成功構(gòu)建了山羊IGF-I真核表達(dá)載體。
　　 上述結(jié)果為安徽白山羊品種的分子標(biāo)記輔助選擇和肉用山羊轉(zhuǎn)基因材料的研制奠定了一定的工作基礎(chǔ)，也為進(jìn)一步研究安徽白山羊的優(yōu)良特性和