轉(zhuǎn)MC4R基因拷貝數(shù)和整合位點(diǎn)的檢測(cè).pdf_第1頁
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1、C1assifiedIndex：Confidential(yes／no)：noCode：10224NO1105283DissertationfortheMasterDegreeDetectionofgeneticaUy^巫伽genecopyl1●■■‘nUmDerannIntegratlonSlteSCandidate：LiBinSupervisor：ProfLiuDiDegreeCategoI了：MasterofAgriculture

2、CoUege：AnimalScienceandTechnologyFirstleVeldiscipline：AnimalHusbandrySecondleVeldiscipline：AnimalGeneticsandBreedingHarbinChinaJune2014東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)碩士學(xué)位論文221豬MC4R基因的克隆與測(cè)序10222重組質(zhì)粒pcDNA31()MC4R的構(gòu)建。12223重組質(zhì)粒pcDNA31()MC4R細(xì)胞轉(zhuǎn)染及陽性

3、檢測(cè)1223RealtimePcR方法對(duì)外源基因拷貝數(shù)的檢測(cè)15231RealtimePCR15232標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立1624利用LMPCR檢測(cè)外源基因的整合位點(diǎn)16241接頭引物及特異性引物序列設(shè)計(jì)16242基因組的酶切與純化。17243純化后的基因組DNA連接接頭17244兩輪PCR擴(kuò)增檢測(cè)18245克隆測(cè)序與序列比對(duì)193結(jié)果與分析2031轉(zhuǎn)豬Mc4R基因小鼠整合位點(diǎn)檢測(cè)2032pcDNA31()Mc4R質(zhì)粒的構(gòu)建21321民豬的M

4、C4R基因的克隆2l322pcDNA31()MC4R質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定2333轉(zhuǎn)染細(xì)胞陽性檢測(cè)24331豬PKl5細(xì)胞的培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染效果24332轉(zhuǎn)染細(xì)胞的陽性檢測(cè)2434絕對(duì)定量PCR對(duì)陽性轉(zhuǎn)染細(xì)胞外源基因拷貝數(shù)的檢測(cè)25341絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)曲線25342外源基因拷貝數(shù)的檢測(cè)2735外源基因整合位點(diǎn)的檢測(cè)28351細(xì)胞基因組的酶切與純化。28352兩輪PCR擴(kuò)增檢測(cè)28353特異性條帶克隆測(cè)序及比對(duì)294討論3241質(zhì)粒的構(gòu)建。3242陽性

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