慢性HBV感染不同轉(zhuǎn)歸組免疫相關(guān)因子基因拷貝數(shù)變異的研究.pdf

1、慢性乙型肝炎（hepatitis B virus，HBV）感染后呈現(xiàn)多樣的疾病譜，目前對于慢乙肝感染后出現(xiàn)不同進(jìn)展的原因尚無一致意見。但研究表明在HBV感染后的病毒清除過程中細(xì)胞免疫反應(yīng)起重要作用，而免疫清除病毒的同時也對肝組織造成了免疫損傷，其中以T淋巴細(xì)胞為主要效應(yīng)細(xì)胞的抗病毒免疫反應(yīng)與肝臟炎癥密切相關(guān)。而免疫反應(yīng)程度在不同宿主間存在差異，因此宿主抗病毒免疫能力的遺傳背景差異是影響HBV感染后疾病進(jìn)展的重要原因。目前研究表明拷貝數(shù)變

2、異（copy number variations，CNVs）可通過基因的劑量效應(yīng)及結(jié)構(gòu)變化對基因表達(dá)產(chǎn)生影響，從而影響疾病的易感性及進(jìn)展等。研究與T淋巴細(xì)胞功能相關(guān)的免疫因子的基因拷貝數(shù)變異在不同慢乙肝感染轉(zhuǎn)歸組的差異有助于進(jìn)一步明確個體免疫遺傳背景在慢乙肝感染過程中所起的作用。
　　 研究內(nèi)容：
　　 檢測88例正常健康對照組、慢乙肝攜帶組、慢性乙肝重型肝炎組（重肝組）、原發(fā)性肝癌組等慢性HBV感染不同疾病轉(zhuǎn)歸組患者基

3、因PDCD1、CD274、BCL2L11、IL7R基因拷貝數(shù)，Kruskal-Waills H檢驗(yàn)和秩變換分析研究四組間四個基因的拷貝數(shù)差異，探討宿主遺傳背景差異與慢乙肝進(jìn)展的關(guān)系。
　　 病例與方法：
　　 1.研究對象
　　 慢性HBV攜帶者、慢性乙型重型肝炎組，原發(fā)性肝癌患者主要來源于2006年6月—2008年12月廣州市第八人民醫(yī)院肝病科住院病區(qū)和?？崎T診，正常健康對照組主要來源于廣州市第八人民醫(yī)院在職職

4、工。納入年齡為20－60歲。診斷符合2005年12月10日《慢性乙型肝炎防治指南》和2001年9月《原發(fā)性肝癌的診斷和分期標(biāo)準(zhǔn)》。
　　 2.研究方法
　　 （1）、利用Taqman real-time PCR技術(shù)測定測定正常健康對照組、慢性HBV攜帶者、慢性乙型重型肝炎組，原發(fā)性肝癌組的PDCD1、CD274、BCl2L11、IL7R的基因拷貝數(shù)。
　　 （2）、Kruskal-Waills H檢驗(yàn)和秩變換分析

5、研究四組間四個基因的拷貝數(shù)差異是否存在差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、四組之間PDCD1基因拷貝數(shù)存在明顯差異（P<0.05[Kruskal-Waills H]）。肝癌組PDCD1拷貝數(shù)明顯低于另三組（P<0.0167[秩變換分析]），攜帶組和重肝組PDCD1拷貝數(shù)高于正常對照組，但差異無顯著性（P>0.0167[秩變換分析]）。攜帶組和重肝組間PDCD1的拷貝數(shù)差異無顯著性（P>0.0167[秩變換分析]）。
　

6、　 2、四組之間CD274基因拷貝數(shù)也存在明顯差異（P<0.05[Kruskal-Waills H]）。其中肝癌組CD274拷貝數(shù)明顯低于攜帶組和重肝組（P<0.0167[秩變換分析]），肝癌組CD274拷貝數(shù)低于正常對照組，但差異無顯著性（P>0.0167[秩變換分析]），攜帶組和重肝組CD274拷貝數(shù)明顯高于對照組（P<0.0167[秩變換分析]），攜帶組和重肝組間CD274的拷貝數(shù)無顯著差異（P>0.0167[秩變換分析]）。<

7、br>　　 3、四組之間BCL2L11基因拷貝數(shù)也存在明顯差異（P<0.05[Kruskal-Waills H]）。肝癌組BCL2L11拷貝數(shù)明顯低于另三組（P<0.0167[秩變換分析]），攜帶組明顯高于另三組（P<0.0167[秩變換分析]）；重肝與對照組間無顯著差異（P>0.0167[秩變換分析]），重肝組拷貝較攜帶組低（P=0.02[秩變換分析]）。
　　 4、四組之間IL7R基因拷貝數(shù)無明顯差異（P>0.05[Kru

8、skal-Waills H]）。
　　 結(jié)論：
　　 1、免疫功能相關(guān)的PD-1、PD-L1、Bim的基因在健康對照組、慢性HBV攜帶組、慢性乙型重型肝炎組、原發(fā)性肝癌組間存在基因拷貝數(shù)變異（CNVs）。
　　 2、攜帶組和重肝組PD-1的基因PDCD1的拷貝數(shù)與正常對照組相比無顯著差異；攜帶組和重肝組PD-L1的基因CD274的拷貝數(shù)較正常對照組高；攜帶組Bim基因BCL2L11的拷貝數(shù)較正常對照組高。

9、　　 3、不同慢乙肝感染轉(zhuǎn)歸組間CD127的基因拷貝數(shù)未見差異。
　　 4、PDCD1、CD274、BCL2L11的基因拷貝數(shù)在肝癌組均低于正常對照組，與其既往表達(dá)研究的結(jié)果不一致。有待對肝癌細(xì)胞基因組作進(jìn)一步研究。
　　 5、免疫相關(guān)因子的基因拷貝數(shù)變異趨勢與基因表達(dá)趨勢不完全一致，特別在攜帶組和重肝組間未發(fā)現(xiàn)顯著的CNVs存在。因此，對基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)研究，以及聯(lián)合基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平進(jìn)行深入研究更有助于全面