黑素皮質(zhì)素受體-4(MC4R)在金錢魚生殖調(diào)控中的功能研究.pdf

1、MC4R屬于G蛋白耦聯(lián)受體超家族(GPCRs)成員之一，大量存在于動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的各個(gè)區(qū)域中，包括大腦皮質(zhì)、丘腦、下丘腦、腦干和脊索。有研究表明，MC4R參與調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物的生殖功能;在魚類中，MC4R主要在腦、垂體和性腺中表達(dá)，且mc4r基因拷貝顯性負(fù)突變可導(dǎo)致較大規(guī)格的雄性劍尾魚推遲性成熟，暗示MC4R可能同樣參與了魚類的生殖調(diào)控，因此，開展魚類MC4R的生殖內(nèi)分泌功能研究，對于深入了解魚類生殖調(diào)控機(jī)理具有重要意義。
　　本文

2、以金錢魚為研究對象，利用同源克隆法，獲得金錢魚mc4r（Scatophagusargusmc4r，SAmc4r）的編碼區(qū)序列，通過半定量PCR(RT-PCR)檢測mc4r的組織分布;利用放射免疫分析法測定MC4R與其廣譜性激動(dòng)劑(NDP-MSH和α-MSH)及特異性激動(dòng)劑(THIQ)的結(jié)合率以及cAMP的生成能力;實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-timePCR)方法檢測了廣譜性激動(dòng)劑NDP-MSH、廣譜性拮抗劑SHU9119、特異性激動(dòng)劑

3、THIQ和特異性拮抗劑Ipsen5i對金錢魚mc4r及生殖相關(guān)基因的表達(dá)影響。主要結(jié)果如下：
　　1.金錢魚mc4r基因的克隆及組織分布
　　金錢魚mc4r基因的編碼區(qū)序列為984bp，編碼327個(gè)氨基酸殘基;氨基酸序列分析表明，金錢魚MC4R均含有G蛋白耦聯(lián)受體典型的功能域，屬于視紫紅質(zhì)家族成員;在進(jìn)化關(guān)系上與同為鱸形目的大黃魚和深裂眶鋸雀鯛親緣關(guān)系較近。
　　組織分布結(jié)果顯示:MC4R具有廣泛的組織分布，具有雌雄間

4、差異，主要分布在腦、垂體與性腺。
　　2.金錢魚MC4R的高敏感性配體的篩選
　　廣譜性及特異性激動(dòng)劑(NDP-MSH、α-MSH和THIQ)均可與金錢魚MC4R競爭結(jié)合，其結(jié)合率大小為:NDP-MSH＞α-MSH＞THIQ;cAMP生成能力大小為:α-MSH＞NDP-MSH＞THIQ。
　　3.MC4R激動(dòng)劑對金錢魚mc4r及生殖相關(guān)基因表達(dá)的影響
　　以廣譜性激動(dòng)劑NDP-MSH和特異性激動(dòng)劑THIQ離體孵育

5、金錢魚下丘腦與垂體，孵育3h二者均可顯著促進(jìn)下丘腦中sbGnRH與垂體中fsh、lhmRNA表達(dá)，孵育6h時(shí)sbGnRH及l(fā)hmRNA表達(dá)仍高于對照組，但fsh恢復(fù)正常;在體實(shí)驗(yàn)表明，腹腔注射THIQ12h及24h均顯著刺激下丘腦中mc4r、sbGnRH與垂體中fsh和lhmRNA的表達(dá)。
　　4.MC4R拮抗劑對金錢魚mc4r及生殖相關(guān)基因表達(dá)的影響
　　以廣譜性拮抗劑SHU9119和特異性拮抗劑Ipsen5i離體孵育金錢

6、魚下丘腦與垂體，孵育3h二者均可顯著抑制下丘腦中sbGnRH與垂體中fsh、lhmRNA的表達(dá)，孵育6h時(shí)SHU9119組恢復(fù)正常，但I(xiàn)psen5i組sbGnRH、lhmRNA仍顯著低于對照組;腹腔注射Ipsen5i12h，可顯著抑制金錢魚下丘腦中mc4r、sbGnRH與垂體中fsh、lhmRNA表達(dá)，24h下丘腦中mc4r和sbGnRHmRNA表達(dá)仍低于對照組，但垂體中fsh、lhmRNA恢復(fù)正常;
　　綜上所述:金錢魚MC4R