瘦素對(duì)皮膚衰老氧化應(yīng)激水平影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　建立接近人體皮膚老化過(guò)程的快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，結(jié)合皮膚老化的氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)，驗(yàn)證瘦素(Leptin)對(duì)皮膚老化過(guò)程中活性氧(ROS)生成及抗氧化防御能力的影響及調(diào)控，判明瘦素在延緩皮膚衰老過(guò)程中可能發(fā)揮的作用及其機(jī)制，從而為瘦素在抗皮膚老化甚至再生受損皮膚的應(yīng)用尋找實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)，為皮膚抗衰老再生醫(yī)學(xué)研究提供新的思路。
　　方法:
　　1.模擬人體皮膚衰老的內(nèi)外源誘發(fā)因素，以D-gal注射聯(lián)合UV

2、輻照的方式，設(shè)置單一D-gal注射組、單一UV輻照組及空白對(duì)照組，從組織形態(tài)學(xué)（組織HE染色、Masson三色染色、彈力纖維染色）改變及氧化應(yīng)激分子指標(biāo)和代謝產(chǎn)物檢測(cè)等變化，分別進(jìn)行比較分析，尋找經(jīng)濟(jì)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、有效的干預(yù)措施和合理的干預(yù)時(shí)間，構(gòu)建快速、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用、周期短、更接近人體皮膚老化進(jìn)程和規(guī)律的動(dòng)物模型。
　　2.在構(gòu)建的皮膚老化動(dòng)物模型基礎(chǔ)上，設(shè)置空白對(duì)照和試驗(yàn)對(duì)照，試驗(yàn)組分為低(5ug/g)、中(10ug/g)、高(2

3、0ug/g)三個(gè)劑量組給予瘦素腹腔內(nèi)注射，6周后取材對(duì)皮膚組織形態(tài)學(xué)和組織勻漿氧化應(yīng)激生化指標(biāo)進(jìn)行比較，研究瘦素調(diào)控氧化應(yīng)激、延緩皮膚老化的作用及可能的最適劑量。
　　3.將瘦素溶液配制為低(5μg/ml)、中(10μg/ml)、高(20μg/ml)濃度，對(duì)培養(yǎng)的HSFs進(jìn)行預(yù)處理，之后行UV輻照，誘導(dǎo)細(xì)胞老化。檢測(cè)HSFs細(xì)胞活力、SA-β-gal活性、氧化應(yīng)激生化指標(biāo)及Western-blot測(cè)定HSFs中p67phox，PK

4、Cε和p66Shc蛋白的表達(dá)。研究瘦素延緩老化、調(diào)控氧化應(yīng)激的可能機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.對(duì)CD-1小鼠以每日UV輻照能量611.28mJ/cm2，隔日一次，聯(lián)合D-gal劑量1mg/g/D，每日頸背部皮下注射的聯(lián)合措施，與其他干預(yù)組對(duì)比，干預(yù)后6周可見(jiàn)明顯的皮膚衰老組織形態(tài)學(xué)變化，氧化應(yīng)激水平也在6周達(dá)到相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài)，較其他干預(yù)組時(shí)間縮短，誘發(fā)老化效果更明顯。
　　2.瘦素系統(tǒng)應(yīng)用，可明顯緩解D-gal聯(lián)合UV誘

5、發(fā)皮膚衰老的組織學(xué)變化。瘦素在皮膚局部發(fā)揮出抗氧化作用，保護(hù)抗氧化酶、減少脂質(zhì)過(guò)氧化和膠原蛋白的降解。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，瘦素對(duì)抗皮膚老化進(jìn)程中的氧化應(yīng)激反應(yīng)有劑量選擇性，本實(shí)驗(yàn)中，中等劑量的瘦素(10ug/g)對(duì)衰老皮膚抗氧化酶的保護(hù)、拮抗脂質(zhì)過(guò)氧化和膠原蛋白降解，能發(fā)揮更好的作用(P＜0.05)。
　　3.瘦素干預(yù)可以緩解UV對(duì)人成纖維細(xì)胞抗氧化酶活性的降低作用及對(duì)膜脂質(zhì)和膠原蛋白的破壞作用，可有效降低UV輻照誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞p67ph