部分天然植物成分對皮膚微循環(huán)、黑素合成以及VEGF分泌的影響.pdf

1、人類皮膚的著色包括結(jié)構(gòu)性著色和功能性著色，結(jié)構(gòu)性著色由遺傳決定，不受外界環(huán)境的影響。功能性著色是環(huán)境因素作用下，黑素合成在基礎(chǔ)水平上的增加。不同種族，皮膚的黑素含量明顯不同，其波動范圍從含量很低的高加索人種(Ⅰ型)一直到含量很高的非洲黑人(Ⅵ型)。黑素的多少、疏密和分布受種族、年齡、性別、部位、地理環(huán)境以及藥物等因素影響。調(diào)查表明，生活在赤道附近的低緯度地區(qū)的人群，皮膚受到紫外線的輻射多，黑素量高，膚色較深；而在高緯度地區(qū)的人群，色素量

2、低，膚色較淡。膚色還受內(nèi)服藥物和外用護膚品的影響。長期使用美白護膚品的皮膚顏色也會變淡。 合成黑素是黑素細胞的最重要功能及分化特征，黑素合成是一個多步驟的酶促生化反應(yīng)，有著復(fù)雜而精確的調(diào)控?，F(xiàn)已知有很多環(huán)節(jié)參與了黑素合成的調(diào)控，包括黑素細胞中編碼黑素合成相關(guān)酶和黑素小體基質(zhì)蛋白基因轉(zhuǎn)錄；4個酪氨酸酶家族成員及酪氨酸酶、酪氨酸酶相關(guān)蛋白-1、酪氨酸酶相關(guān)蛋白-2的翻譯；酪氨酸酶翻譯后加工和糖基化；黑素細胞中的囊泡融合形成黑素小體，

3、成熟的酪氨酸酶轉(zhuǎn)運進入黑素小體，從而啟動黑素合成；調(diào)節(jié)酪氨酸酶家族成員的活性、黑素小體中Ph值以及SH基團的數(shù)目；黑素合成后的修飾及向周圍角質(zhì)形成細胞的轉(zhuǎn)運；黑素小體在角質(zhì)形成細胞中的降解。這些環(huán)節(jié)中任一靶點變化均可影響黑素合成。目前有關(guān)黑素合成的研究主要是圍繞酪氨酸酶家族成員的調(diào)節(jié)展開的。酪氨酸酶是黑素合成的關(guān)鍵酶，該酶催化黑素合成早期限速步驟，即底物酪氨酸羥化和多巴氧化。黑素合成的速率與酪氨酸酶的量和活性直接相關(guān)。TRP-1和酪氨酸

4、酶有著共同的催化活性，TRP-1的合成速率與黑素合成呈正相關(guān)。TRP-2催化多巴色素轉(zhuǎn)化為5，6-二羥吲哚乙酸，催化黑素合成的后續(xù)步驟。翻譯后的TYR、TRP-1、TRP-2糖基化過程都可以影響黑素合成。近年來，從天然植物中篩選出來安全而有效的藥物作為脫色劑或增色劑備受人們的青睞。本研究選擇了一些傳統(tǒng)中藥認為對黑素合成有抑制作用的中藥，進一步研究其對培養(yǎng)的人表皮黑素細胞的影響，以期篩選出更有效的抑制黑素合成的植物成分。 血管和血

5、流在真皮血管中，有另外三種色素，即氧合血紅蛋白(鮮紅色)、血紅蛋白(藍紅色)和膽紅素(黃色)。真皮毛細血管網(wǎng)位于表皮下50～500μm處。皮膚的毛細血管網(wǎng)是一個復(fù)雜的動力系統(tǒng)，對皮膚顏色、溫度調(diào)節(jié)、皮膚代謝和透皮轉(zhuǎn)運起著非常重要的作用。皮膚不同狀態(tài)和局部外用藥物都可以誘導(dǎo)皮膚微循環(huán)產(chǎn)生顯著變化，進而對皮膚顏色產(chǎn)生影響。皮膚血管和其中的血液，使皮膚“黑里透紅，，或“白里透紅”。血管較少、較深、血管收縮或供血減少等處皮膚蒼白；反之則紅潤。

6、 微血管舒縮和血流速度對皮膚的顏色也有很大的影響。微循環(huán)將血紅蛋白運輸至皮膚，微循環(huán)速度加快，為皮膚的角質(zhì)形成細胞等提供了充足的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，并及時將細胞的代謝產(chǎn)物和各種有害物質(zhì)如超氧陰離子等清除，減少膠原纖維的氧化，并使皮膚的各種細胞維持良好的功能，角質(zhì)層水分充足，保持皮膚表面的明亮光澤。因此研制能夠改善皮膚微循環(huán)的護膚品對延緩皮膚衰老、改善膚色起著非常重要的作用。 在黑素較多的皮膚，紅色的氧合血紅蛋白和藍紅色的血紅蛋

7、白對皮膚的顏色影響很小。如果能夠在避免各種有害環(huán)境因素的前提下，抑制皮膚中的黑素合成，改善皮膚的微循環(huán)，既可增加皮膚的紅潤，又可以為皮膚提供充足的氧氣和養(yǎng)分供應(yīng)，也可以減少膠原的氧化。 自1961以來，氫醌成為最受歡迎的美白成分之一，但由于其對皮膚細胞的毒性作用而限制其應(yīng)用。最近全球市場的增長需要更多新的成分用于治療色素沉著性疾病或添加到美白化妝品中。新的生物活性成分包括中草藥、維生素、微量元素等多種天然成分。人們使用天然植物的

8、歷史源遠流長，在過去幾年中，主要由于牛海綿狀腦炎的出現(xiàn)，一些動物來源的產(chǎn)品被限制使用而需要替代品，在能夠人工合成相似的活性成分前，植物將是化妝品主要和基本的成分，植物成分作為化妝品的配方將不斷在增長。本研究從傳統(tǒng)中醫(yī)藥的配方中，選擇常用的活血化淤成分，運用激光多普勒檢測其對皮膚甲皺微循環(huán)的影響，篩選出能改善皮膚微循環(huán)的成分，同時從細胞、分子水平研究其對黑素細胞黑素合成、酪氨酸酶活性、表達以及其對角質(zhì)形成細胞合成和分泌VEGF的影響。

9、 第一部分橙皮苷、β-七葉皂苷、丹參酮等局部外用對甲皺皮膚微循環(huán)的影響 研究了局部外用8種天然植物提取物對皮膚微循環(huán)的影響。給受試者中指甲皺處分別涂1﹪植物提取物，并安放激光多普勒檢測探頭，穩(wěn)定5min后開始記錄甲皺皮膚血流灌注量，以后每5min記錄1次，每次1min，取平均值，共觀察30min。基質(zhì)作對照。對有效成分進一步觀察濃度為0.10﹪、0.01﹪藥物對皮膚血液灌注量的影響，并用毛細血管微循環(huán)儀觀察其對紅細胞血流速度

10、的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)1.00﹪、0.10﹪橙皮苷可以顯著增加皮膚的血液灌注量，外用0.10﹪橙皮苷亦可使紅細胞的血流速度顯著增加。提示在篩選的中藥中，橙皮苷局部外用可以改善皮膚的微循環(huán)。 第二部分1.橙皮苷對人黑素細胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影響觀察了橙皮苷對人原代黑素細胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影響，探討其作用機制。選擇50、100、200、400、500和600μg/mL6個濃度的橙皮苷作用于體外培養(yǎng)的人表皮黑素細胞72h，測定

11、細胞增殖活性，分別測量50、100、200μg/mL的橙皮苷對酪氨酸酶活性和黑素含量的影響。結(jié)果顯示橙皮苷顯著抑制黑素合成和酪氨酸酶活性，與空白對照組相比，50、100、200μg/mL的橙皮苷對黑素合成的抑制作用分別為16.96﹪、27.02﹪、43.09﹪，對酪氨酸酶活性的抑制作用分別為13.01﹪、19.74﹪、31.14﹪，且呈濃度依賴性。提示橙皮苷可抑制黑素合成和酪氨酸酶活性，這種作用可能與橙皮苷下調(diào)酪氨酸酶的活性有關(guān)。

12、 2.甘草對人黑素細胞黑素合成的影響及其機制觀察了甘草對人原代黑素細胞酪氨酸酶及黑素合成的影響，探討其作用機制。選擇2.5、5.0、10.0、15.0、20.0和30.0μg/mL6個濃度的甘草作用于體外培養(yǎng)的人表皮黑素細胞72h，分別測定細胞增殖活性、酪氨酸酶活性和黑素含量，westernblot方法檢測甘草作用后黑素細胞中酪氨酸酶蛋白表達的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)甘草顯著抑制黑素合成和酪氨酸酶活性，且呈濃度依賴性，與空白對照組相比較，濃度為

13、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0和30.0μg/mL的甘草對酪氨酸酶的抑制分別為18.2﹪、21.55﹪、29.95﹪、45.04﹪、47.4﹪和49.36﹪，對黑素合成的抑制作用分別為17.61﹪、20.95﹪、21.53﹪、43.71﹪、47.39﹪和43.32﹪，甘草可明顯抑制黑素細胞中酪氨酸酶的表達。說明甘草可抑制黑素合成和酪氨酸酶活性，這種作用可能與甘草下調(diào)酪氨酸酶的表達有關(guān)。 3.表沒食子兒茶素沒食子酸酯

14、對人表皮黑素細胞黑素合成的影響 觀察表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)對體外培養(yǎng)的人表皮黑素細胞的黑素合成和酪氨酸酶(TYR)活性以及酪氨酸酶、酪氨酸酶相關(guān)蛋白(TRP)-1、TRP-2mRNA表達的影響，探討EGCG對黑素合成的影響及其作用機制。選擇5.0、10.0、12.5、15.0、20μg/mL5個濃度的EGCG作用于體外培養(yǎng)的人表皮黑素細胞72h，分別測定細胞增殖活性、酪氨酸酶活性和黑素含量；采用逆轉(zhuǎn)錄(RT)-PC

15、R半定量檢測EGCG作用后，對黑素細胞中TYR、TRP-1、TRP-2mRNA表達的影響。結(jié)果顯示EGCG顯著抑制黑素合成和TYR活性，且呈濃度依賴性；EGCG可明顯抑制黑素細胞中TYRmRNA和TRP-1mRNA的表達，但對TRP-2mRNA的表達無明顯影響。提示EGCG可抑制黑素合成和TYR活性，這種作用可能與EGCG下調(diào)TYR和TRP-1的表達有關(guān)。 第三部分1.橙皮苷對原代角質(zhì)形成細胞分泌血管內(nèi)皮細胞生長因子的影響

16、 觀察了橙皮苷對體外培養(yǎng)的人原代角質(zhì)形成細胞的增殖及其分泌血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)的影響。選擇0～16000μg/mL12個濃度的橙皮苷作用于體外培養(yǎng)的人原代角質(zhì)形成細胞72h，四甲基偶氮唑藍(MTT)法測定細胞增殖活性，ELISA法檢測細胞分泌的VEGF水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，橙皮苷對原代角質(zhì)形成細胞增殖無明顯影響；空白對照組細胞上清中VEGF濃度為164.52pg/mL，加藥組藥物濃度為50μg/mL時對角質(zhì)形成細胞