3-呋喃基吲唑衍生物的合成及其抗肝纖維化活性研究.pdf

1、吲唑是一類(lèi)重要的有機(jī)合成中間體，它在很多藥物中扮演著非常有效的藥效團(tuán)。比如，3-(5’-甲氧基-2’-呋喃基)-1-芐基吲唑，即YC-1，它具有多種藥理活性，可作為可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶的激活劑，缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1抑制劑等。相對(duì)于YC-1的抗癌等活性研究，其抗肝纖維化活性少有報(bào)道。肝纖維化是肝臟對(duì)許多慢性炎癥刺激的損傷修復(fù)反應(yīng)，是許多慢性肝病發(fā)展為肝硬化甚至肝癌的必經(jīng)階段。因此，合成一系列新的呋喃吲唑化合物，對(duì)其抗肝纖維化進(jìn)行深入研究十

2、分必要。本研究合成了一系列新的呋喃吲唑衍生物及YC-1，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，以人肝星狀細(xì)胞（LX-2）為肝纖維化細(xì)胞模型，研究其抗肝纖維化活性及其初步作用機(jī)制。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴考慮到電荷分布對(duì)活性的影響，同時(shí)，在藥物分子適當(dāng)位置引入大體積基團(tuán)，因其空間位阻，可保護(hù)藥物分子活性部位免受非靶蛋白的攻擊，增加藥物分子的穩(wěn)定性。因此，將分別在呋喃吲唑環(huán)的1號(hào)位N上或呋喃環(huán)上引入羰基及剛性大體積烷基，合成新的呋喃吲唑衍生物用于抗肝纖維

3、化研究。⑵通過(guò)CCK-8實(shí)驗(yàn)考察所有化合物對(duì)LX-2細(xì)胞增殖活性的影響。用不同濃度（0,5,25,50,100uM）的化合物預(yù)處理細(xì)胞24小時(shí)，然后用CCK-8處理細(xì)胞1h,檢測(cè)細(xì)胞活力，篩選出活性較好化合物進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。⑶通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)著重考察FIAC，F(xiàn)IPOC，F(xiàn)IMPa及YC-1四種化合物對(duì)LX-2細(xì)胞凋亡的影響。25uM四種化合物分別預(yù)處理細(xì)胞24或48小時(shí)，先用顯微鏡觀察LX-2細(xì)胞形態(tài)變化，后收集細(xì)胞用分別PI單染或

4、Annexin V FITC/PI雙染處理，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。⑷通過(guò)western blot實(shí)驗(yàn)考察四種化合物對(duì)α-SMA和caspase-3蛋白表達(dá)的影響。用25uM四種化合物分別預(yù)處理細(xì)胞1、3、12小時(shí)，收集細(xì)胞提取蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。⑸合成了YC-1及N上含甲酰基和較大體積烷基的FIAC，F(xiàn)IACA，F(xiàn)IPOC，F(xiàn)IPOCA四種化合物，呋喃環(huán)上含丙炔酰胺基的FIMPa，以及含缺電子烯烴結(jié)構(gòu)的FIMC等9種衍生物。⑹FIA

5、C，F(xiàn)IPOC，F(xiàn)IMPa，YC-1，F(xiàn)IMA，F(xiàn)IA對(duì)L X-2細(xì)胞增殖有明顯抑制作用，其中IC50值分別為48.7,49.0,115.3，78.5,73.8,75.0uM；含有缺電子烯烴結(jié)構(gòu)的9種衍生物對(duì)LX-2細(xì)胞有明顯的增殖促進(jìn)作用。⑺FIAC，F(xiàn)IPOC，F(xiàn)IMPa，YC-1四種化合物都能夠誘導(dǎo)LX-2細(xì)胞凋亡，尤其FIAC,25uM濃度下處理48h誘導(dǎo)細(xì)胞死亡率達(dá)到53.9％。⑻四種化合物都能抑制α-SMA蛋白表達(dá)，并且具有

6、時(shí)間依賴(lài)性，與對(duì)照組相比，其中FIAC在3h時(shí)抑制效果達(dá)到50%以上，比YC-1抑制效果明顯提高；同時(shí)四種化合物都能夠促進(jìn)caspase-3蛋白表達(dá)、激活，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。其中FIAC促進(jìn)作用尤為明顯，比對(duì)照組提高了2倍以上，可作為潛在的抗肝纖維化試劑。⑼與原有合成方法相比，本論文合成方法反應(yīng)條件更溫和，縮短了合成步驟，提高了產(chǎn)率。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí),新化合物FIAC、FIPOC、FIMPa能夠通過(guò)抑制a-SMA表達(dá)，進(jìn)而抑制LX-2細(xì)胞活