右美托咪定復(fù)合烏司他丁對(duì)梗阻性黃疸大鼠肝損傷的保護(hù)機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　比較右美托咪定及烏司他丁對(duì)梗阻性黃疸大鼠肝臟功能及炎癥因子表達(dá)的影響,進(jìn)而研究探討兩藥聯(lián)用對(duì)梗阻性黃疸大鼠肝損傷的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。
　　方法:
　　選取40只雄性SD大鼠,鼠齡8周,體重為230～270g,隨機(jī)數(shù)字表法分為5組(n=8):假手術(shù)組(Sham組)、生理鹽水組(NS組)、右美托咪定治療組(DEX組)、烏司他丁治療組(UTI組)和右美托咪定復(fù)合烏司他丁治療組(DEX+UTI組)。經(jīng)尾靜脈采集

2、大鼠血液標(biāo)本并收集肝臟組織,檢測(cè)方法與檢測(cè)指標(biāo):1)通過(guò)全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清肝功能(包括ALT、AST、TBIL和TP)。2)通過(guò)ELISA法檢測(cè)血清TNF-α、IL-6的活性,觀察血清中炎性因子水平的變化。3)石蠟標(biāo)本切片用于HE染色以及免疫組化,觀察肝臟形態(tài)學(xué)改變及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況。4)冰凍標(biāo)本用于實(shí)時(shí)定量PCR和Western檢測(cè),指標(biāo)包括TNF-α、IL-6、TLR4和NF-κB。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠肝

3、臟組織病理學(xué)HE染色光鏡觀察結(jié)果:Sham組肝臟光鏡觀察未見(jiàn)明顯變化,NS組的大鼠肝組織出現(xiàn)嚴(yán)重的病理組織學(xué)損傷改變,包括明顯的肝細(xì)胞變性,廣泛肝細(xì)胞壞死,大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),肝血竇擴(kuò)張以及肝內(nèi)膽管顯著增生。DEX組、UTI組及聯(lián)合應(yīng)用組大鼠肝組織損害明顯改善,僅見(jiàn)部分肝臟組織膽管增生和空泡變性。
　　2.各組大鼠血清肝功能檢測(cè)結(jié)果:與Sham組相比,NS組的血清TBIL,ALT和AST水平顯著增高,TP水平顯著降低,組間差異具有統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)意義(p＜0.001);與NS組相比,DEX組、UTI組和DEX+UTI組血清肝生化功能結(jié)果TBIL,ALT和AST水平顯著降低,TP水平顯著增高,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001);聯(lián)合組效果優(yōu)于單獨(dú)用藥組,UTI組的TBIL治療效果優(yōu)于DEX組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,兩組單獨(dú)用藥組的ALT、AST、TP差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　3.各組大鼠血清IL-6和TNF-α的ELISA檢測(cè)結(jié)果:與Sham組相比,NS

5、組的血清IL-6和TNF-α水平顯著增高,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001);與NS組相比,三組藥物治療組的血IL-6和TNF-α水平顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001);聯(lián)合組效果優(yōu)于單獨(dú)用藥組,而兩組單獨(dú)用藥組組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　4.各組大鼠肝臟組織病理學(xué)免疫組化觀察結(jié)果:在Sham組肝組織中,TLR4和NF-κB幾乎沒(méi)有或有很少表達(dá),NS組中二者的表達(dá)水平明顯高于Sham組,三組藥物治療組

6、中,兩藥單用或聯(lián)用都能引起這兩個(gè)分子的表達(dá)下調(diào)。
　　5.各組大鼠肝臟組織炎癥因子的PCR檢測(cè)結(jié)果:實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示,mRNA水平上,NS組的IL-6、TNF-α、TLR4和NF-κB四個(gè)炎癥相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)水平都顯著高于Sham組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001)。三組藥物治療后,以上指標(biāo)有不同程度的恢復(fù),DEX+UTI藥物聯(lián)用組的恢復(fù)更為明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,單獨(dú)用藥組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
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7、.各組大鼠肝臟組織炎癥因子的Western blot蛋白檢測(cè)結(jié)果:與Sham組相比,IL-6、TNF-α、TLR4和NF-κB四個(gè)炎癥指標(biāo)在NS組顯著增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001);與NS組相比,DEX組、UTI組和DEX+UTI組四項(xiàng)炎癥指標(biāo)水平顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001);其中,聯(lián)合治療組的IL-6和TNF-α顯著低于單獨(dú)用藥組;而TLR4和NF-κB在單獨(dú)用藥組和聯(lián)合用藥組并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。