人參皂苷Re促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷后周圍神經(jīng)再生的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　1、基于人參皂苷Re在體內(nèi)和體外都通過不同的機(jī)制來發(fā)揮生理學(xué)功能的特性，探索能夠促進(jìn)神經(jīng)再生的有效藥物。
　　2、在坐骨神經(jīng)損傷(SNC)大鼠模型中，評(píng)估人參皂苷Re對(duì)施萬細(xì)胞的增殖、分化和遷移的影響。
　　3、探索人參皂苷Re處理的坐骨神經(jīng)損傷模型中周圍神經(jīng)損傷修復(fù)的機(jī)制。
　　方法：
　　1、動(dòng)物模型的建立與取材
　　(1)選用健康成年SD大鼠(180-220g)，雌雄不限。
　

2、　(2)將健康成年SD大鼠放置在動(dòng)物中心適應(yīng)性生長14大，食水不限。
　　(3)將大鼠分成Normal組(n=4)，Saline組(n=4)，損傷組，（Re用量分別為0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0mg/kg，每組n=4），Normal組不作處理，Sanline組給予同劑量的生理鹽水。連續(xù)給藥三周。
　　(4)在給藥的第二周，選取大鼠，應(yīng)用復(fù)合麻醉劑(3ml/kg)施以腹腔注射，使得大鼠麻醉。
　　(

3、5)應(yīng)用嚴(yán)格滅菌的手術(shù)器械于大鼠右側(cè)大腿中間部切開，暴露出坐骨神經(jīng)，找到距離其分叉0.5cm處。
　　(6)坐骨神經(jīng)夾傷模型的建立，應(yīng)用滅菌止血鉗夾3次，每次持續(xù)10s，三次之間間隔10s。
　　(7)坐骨神經(jīng)缺損模型的建立，應(yīng)用滅菌器械分別造成0.2、0.5、1cm的缺損。
　　(8)根據(jù)坐骨神經(jīng)損傷后所設(shè)的8個(gè)觀察時(shí)相點(diǎn)隨機(jī)將大鼠分為8個(gè)實(shí)驗(yàn)組:0小時(shí)（即正常組）、6小時(shí)、12小時(shí)、1天、3天、5天、1周和2周。每

4、個(gè)實(shí)驗(yàn)組6只大鼠，其中3只用于免疫印跡，另外3只用于組織切片檢測。
　　2、運(yùn)用足跡分析評(píng)估坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(SFI)和展趾功能指數(shù)(TSI)。
　　3、免疫印跡和免疫熒光檢測坐骨神經(jīng)損傷后周圍神經(jīng)再生的指標(biāo)變化情況。
　　4、免疫印跡檢測人參皂苷Re對(duì)p-ERK、p-JNK、p-p38表達(dá)變化的影響。
　　5、細(xì)胞水平檢測人參皂苷Re對(duì)施萬細(xì)胞遷移作用的影響。
　　結(jié)果：
　　1、免疫印跡結(jié)果顯示，

5、坐骨神經(jīng)損傷后，人參皂苷Re可以以劑量依賴性的方式調(diào)節(jié)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)。
　　2、電鏡組織學(xué)分析表明2.0mg/kg人參皂苷Re可以保護(hù)坐骨神經(jīng)，促進(jìn)髓鞘的再生，保護(hù)神經(jīng)纖維的形狀。
　　3、免疫熒光結(jié)果表明軸突生長相關(guān)蛋白（GAP-43），施萬細(xì)胞的marker(S-100)，神經(jīng)元的marker(NF-200)在人參皂苷Re作用下，與坐骨神經(jīng)損傷對(duì)照組相比其表達(dá)發(fā)生了明顯的變化。
　　4、免疫熒光雙

6、標(biāo)結(jié)果顯示，坐骨神經(jīng)損傷模型中，人參皂苷Re可以顯著增強(qiáng)施萬細(xì)胞中PCNA的表達(dá)。
　　5、免疫印跡以及免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果表明在坐骨神經(jīng)損傷模型中，人參皂苷Re可以顯著增強(qiáng)施萬細(xì)胞中八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子6(Oct-6)的表達(dá)，并能促進(jìn)施萬細(xì)胞的分化。
　　6、免疫印跡結(jié)果表明在提取的原代施萬細(xì)胞中，人參皂苷Re可以顯著增加p-ERK、p-JNK的表達(dá)，而對(duì)p-p38的表達(dá)卻沒有明顯的影響。
　　7、運(yùn)用trans-well