巨噬素通過(guò)脂氧素A4受體-cAMP-ROS通路緩解膿毒血癥引起的線粒體功能損傷.pdf

1、目的:
　　探討巨噬素(Maresin，MaR1)，一種主要由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的具有強(qiáng)大抗炎促消退作用的新型脂質(zhì)介質(zhì)，在小鼠膿毒血癥模型(cecal ligation and puncture，CLP)中對(duì)其生存率、體內(nèi)炎癥因子表達(dá)、腹腔內(nèi)炎癥細(xì)胞及細(xì)菌含量、組織活性氧(ROS)和線粒體相關(guān)蛋白的影響，以及在人全血LPS體外模型中對(duì)ROS的作用，為臨床膿毒血癥的治療提供一個(gè)新策略。
　　方法:
　　第一部分:選取25-30

2、g雄性C57BL/6小鼠，在麻醉下施行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)，給予37℃生理鹽水補(bǔ)液(5ml/100g)，在保溫毯上復(fù)溫，制作膿毒血癥的動(dòng)物模型。共分為假手術(shù)組，CLP組，CLP后給巨噬素(100ng/mice)，24h后取樣本，通過(guò)血?dú)夥治鲇^察血中乳酸表達(dá);用ELISA測(cè)血漿中的炎癥因子，肺組織中cAMP含量，檢測(cè)SOD，CAT活性，ROS量;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)腹腔灌洗液中炎癥細(xì)胞和細(xì)菌變化;HE染色分析重要器官組織形態(tài)學(xué)改變。同時(shí)

3、，上述三組造模給藥后均對(duì)其7內(nèi)生存率進(jìn)行記錄檢測(cè)。
　　第二部分:同樣選取25-30g雄性C57BL/6小鼠，分為CLP組，CLP后給巨噬素組(100ng/mice)，CLP后給巨噬素和BOC-2組或CLP后給巨噬素和SQ22536組，術(shù)后24h后取動(dòng)脈血觀察乳酸表達(dá)，用ELISA測(cè)血漿中的炎癥因子TNF-α和肺組織中cAMP含量，光鏡下觀察肺組織病理學(xué)變化，檢測(cè)肺組織內(nèi)SOD，CAT活性，ROS量，測(cè)定肺組織中線粒體內(nèi)相關(guān)蛋白量

4、。
　　第三部分:采取健康志愿者和sepsis病人外周靜脈全血，以1∶1的體積比例加入培養(yǎng)基RPMI-1640，含10％胎牛血清，加入LPS100ng/ml，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中共同培養(yǎng)6h，制作內(nèi)毒素性膿毒血癥體外模型。分為空白對(duì)照組(Con)、LPS組、LPS+巨噬素組、LPS+M+BOC-2組、LPS+M+SQ22536組?；厥昭?，分離血漿檢測(cè)SOD、NOX活性，檢測(cè)全血細(xì)胞內(nèi)ROS含量。
　　結(jié)果:
　　1.在活

5、體實(shí)驗(yàn)中，與假手術(shù)組相比，CLP術(shù)后7天生存率明顯降低，術(shù)后24h，小鼠血漿內(nèi)的炎癥因子TNF-α，MPO等迅速上升，腹腔內(nèi)細(xì)菌含量急劇升高，肺組織切片有病理學(xué)改變，乳酸值明顯提高。
　　2.CLP術(shù)后給予巨噬素治療組較CLP組，上述炎癥損傷表現(xiàn)有明顯改善，生存率升高(P＜0.01);炎癥因子也明顯下降，腹腔內(nèi)細(xì)菌數(shù)也有所減少，巨噬細(xì)胞/中性粒細(xì)胞值升高;乳酸和ROS的體內(nèi)含量也下調(diào)了。這些指標(biāo)相比假手術(shù)組，只有小幅度上升，差異無(wú)

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.在術(shù)后給予巨噬素治療后又給予BOC-2(脂氧素受體抑制劑，600ug/kg)或SQ22536(cAMP抑制劑，10mg/kg)后，巨噬素的治療作用消失，膿毒血癥中重要指標(biāo)血乳酸含量明顯上升，線粒體呼吸鏈相關(guān)酶SDHA、ATP5A及線粒體功能蛋白ClpP等都減少了。
　　4.在人外周血LPS刺激模型和膿毒血癥病人外周靜脈血中，巨噬素治療組ROS含量均顯著降低，而同時(shí)給予BOC-2(10uM)和SQ2253

7、6(20M)后廢除了此現(xiàn)象。對(duì)于ROS代謝酶活性，巨噬素是NOX活性減弱而水解酶SOD，CAT活性增高;阻滯劑BOC-2(10uM)和SQ22536(20M)的加入，使NOX，SOD活性與膿毒血癥組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　巨噬素可以通過(guò)脂氧素A4受體(ALX)-cAMP信號(hào)通路影響ROS相關(guān)代謝酶活性，以及線粒體氧化呼吸鏈復(fù)合酶含量而減少ROS的產(chǎn)生;降低乳酸含量，減少體內(nèi)炎癥因子:IL-1β、TNF-α、MP