化瘀通絡(luò)中藥及其拆方對糖尿病腎病大鼠的干預(yù)作用及對裂孔膜蛋白Nephrin和NEPH1的影響.pdf

1、目的：糖尿病腎?。―N）是糖尿病（DM）常見的微血管并發(fā)癥之一，也是糖尿病患者致殘、致死的重要原因。本研究旨在觀察化瘀通絡(luò)中藥及其拆方對DN大鼠的干預(yù)作用及對裂孔膜蛋白Nephrin、NEPH1水平的影響，探討其可能的作用機制，并比較化瘀通絡(luò)中藥及其拆方的作用差別，為臨床防治 DN提供實驗依據(jù)。
　　方法：健康雄性SD大鼠80只，體重100g±10g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機分為正常對照組（C組）10只，造模組70只。C組大鼠予普通

2、飼料喂養(yǎng)，造模組大鼠予高糖高脂飼料喂養(yǎng)。4周后，造模組大鼠予鏈脲佐菌素（STZ）溶液（35mg/kg）腹腔注射，C組注射相應(yīng)體積枸櫞酸緩沖液。72小時后隨機血糖≥16.7mmol/L為DM造模成功。將成模大鼠隨機分為模型組（M組）、化瘀通絡(luò)組（Q組）、化瘀組（H組）、通絡(luò)組（T組）、厄貝沙坦組（I組）。各治療組分別給予相應(yīng)藥物灌胃， C組、M組灌服相應(yīng)體積蒸餾水，連續(xù)干預(yù)16周。于16周末收集24小時尿液，檢測24小時尿蛋白定量；麻醉狀

3、態(tài)下腹主動脈取血檢測血液指標(biāo)；留取腎組織，應(yīng)用光鏡、電鏡觀察大鼠腎臟病理改變；采用免疫組化、Western Blot、Real-time PCR方法檢測足細胞裂孔膜蛋白Nephrin、NEPH1的表達水平。
　　結(jié)果：
　　1.實驗大鼠的一般情況:C組大鼠一般情況良好；與C組比較，造模大鼠逐漸出現(xiàn)多食、多飲、多尿及體重減輕表現(xiàn)，其中以 M組尤甚，各給藥組大鼠在治療過程中諸癥均有不同程度緩解。
　　2腎重、體重及腎臟肥大

4、指數(shù):大鼠腎重各組間無統(tǒng)計學(xué)差異。與 C組相比，M組大鼠體重減輕，腎臟肥大指數(shù)升高，有統(tǒng)計學(xué)差異；與M組比較，各治療組體重、腎臟肥大指數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　3.24小時尿蛋白定量（24hUTP）:與C組比較，M組大鼠24hUTP明顯增多；與M組比較，各治療組24hUTP明顯減少；各治療組相比，Q組與I組比較24hUTP無明顯差異，Q組24hUTP少于H、T組。
　　4.空腹血糖（FBG）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）:

5、與C組比較，造模各組FBG均明顯升高；造模各組間FBG無統(tǒng)計學(xué)差異。與C組比較，M組大鼠TC、TG均明顯升高；各治療組大鼠較M組，TC、TG明顯降低；各治療組比較，TC無統(tǒng)計學(xué)差異，Q組TG少于H、T、I組。
　　5.總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血肌酐（Scr）:大鼠TP、ALB水平組間無明顯差異。與C組比較，M組大鼠Scr水平明顯升高；與M組比較，Q組Scr水平下降，I、H、T組與M組比較無差異。
　　6.血漿凝血酶

6、原時間（PT）:與C組比較，M組PT明顯降低；與M組比較，Q組PT顯著延長，I、H、T組與M組比較無差異。
　　7.腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察
　　7.1光鏡觀察:C組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)正常；M組大鼠腎小球肥大，部分腎小囊腔變窄，系膜基質(zhì)增多，基底膜增厚；與M組相比，各治療組病理改變明顯減輕， H組病理表現(xiàn)略重于其它治療組。
　　7.2電鏡觀察:C組大鼠腎小球超微結(jié)構(gòu)基本正常；M組大鼠腎小球基底膜均質(zhì)性增厚，系膜基質(zhì)增多，足突融合

7、；與 M組比較，各治療組病理改變明顯減輕，H組病理表現(xiàn)略重于其它治療組。
　　8.免疫組織化學(xué)法檢測腎組織Nephrin、NEPH1的表達。結(jié)果顯示：Nephrin、NEPH1兩種蛋白主要表達于腎小球。與C組相比，各造模組大鼠Nephrin、NEPH1表達減少；與M組相比，各治療組Nephrin、NEPH1表達增多。
　　9.Western Blot檢測腎組織Nephrin、NEPH1的表達。與C組比較，M組大鼠Nephri

8、n、NEPH1蛋白表達均明顯下降；與M組比較，Q、I、T組Nephrin、NEPH1蛋白表達增加， H組與M組相比無明顯差異；各治療組相比，NEPH1蛋白表達未見明顯差異，Q組Nephrin蛋白表達高于H、T、I組。
　　10.Real-time PCR檢測腎組織Nephrin、NEPH1 mRNA的表達。與C組比較，M組大鼠Nephrin、NEPH1mRNA表達明顯下降；與M組比較，各治療組Nephrin、NEPH1mRNA表達

9、增加；各治療組相比，NEPH1 mRNA表達未見明顯差異，Q、T、I組Nephrin mRNA表達量較高，與H組有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.化瘀通絡(luò)中藥可以改善DN大鼠一般情況、減少尿蛋白、降低DN大鼠總膽固醇及甘油三酯水平、降低血肌酐、延長凝血酶原時間、減輕DN腎臟病理損傷，具有腎保護作用。
　　2.化瘀通絡(luò)中藥可能通過上調(diào)Nephrin、NEPH1表達水平，而部分修復(fù)足細胞，減少尿蛋白，發(fā)揮腎保護作用。