泄?jié)峤舛?、活血通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟的保護(hù)作用及對(duì)MMP-9-TIMP-1的影響.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)通過建立糖尿病腎病(DN)的動(dòng)物模型，應(yīng)用泄?jié)峤舛尽⒒钛ńj(luò)中藥對(duì)動(dòng)物模型進(jìn)行治療，通過觀察大鼠血糖、血脂、血清總蛋白、白蛋白、24小時(shí)尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮等生化指標(biāo)、腎臟病理學(xué)變化、免疫組化法檢測(cè)腎組織中基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑TIMP-1的表達(dá)水平，研究泄?jié)峤舛?、活血通絡(luò)中藥治療糖尿病腎病的作用機(jī)制，為在臨床推廣應(yīng)用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　糖尿病腎病的治療研究雖然取得了長足的進(jìn)展，但到

2、目前為止沒有有效的治療方案和藥物，導(dǎo)師檀金川教授根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論并結(jié)合臨床實(shí)踐，以泄?jié)峤舛尽⒒钛ńj(luò)方為基本方，治療糖尿病腎病臨床療效確切，本研究以MMP-9/TIMP-1在糖尿病腎病腎組織的表達(dá)情況證實(shí)本方治療糖尿病腎病的療效。
　　方法:選用85只雄性健康清潔級(jí)SD大鼠，體重160-180克，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分15只為正常組，造模組70只，除正常組予普通飼料喂養(yǎng)外，造模組給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，并一次性予大鼠腹腔注射鏈脲佐

3、菌素（streptozotocin，STZ）(35mg/kg)，72小時(shí)后尾靜脈取血測(cè)血糖，血糖≥16.7mmol/L為DM造模成功。造模過程中死亡兩只，另有一只血糖未達(dá)標(biāo)，均予以剔除。造模組隨機(jī)分為4組，中藥組、西藥組、中藥+西藥組、模型組。正常組、模型組給予相當(dāng)劑量生理鹽水灌胃，中藥組予泄?jié)峤舛?、活血通絡(luò)中藥灌胃，西藥組予厄貝沙坦灌胃，中藥+西藥組予中藥聯(lián)合厄貝沙坦灌胃每日一次，第16周末禁食不禁水，收集24 h尿液，檢測(cè)各組大鼠2

4、4h尿蛋白定量，麻醉大鼠后在腹主動(dòng)脈處取血，檢測(cè)糖化血紅蛋白、肌酐、尿素氮、血清蛋白、血脂;摘除腎臟，稱量腎臟的重量，分離皮髓質(zhì)，在光鏡、電鏡下觀察各組大鼠腎臟的病理形態(tài)學(xué)改變，用免疫組化法檢測(cè)各組大鼠MMP-9、TIMP-1在腎組織的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1大鼠一般狀態(tài)及存活率觀察
　　結(jié)果顯示:健康雄性SD大鼠85只，15只為正常組大鼠，正常組大鼠體重進(jìn)行性增加，精神狀態(tài)良好，無死亡情況。造模組注射STZ后，

5、均出現(xiàn)明顯的多飲、多食、多尿癥狀，逐漸出現(xiàn)毛發(fā)無光澤，飲食減少，精神萎靡，體型偏小等癥狀，治療組在給藥后飲食量逐漸增加，精神狀態(tài)轉(zhuǎn)好。
　　在實(shí)驗(yàn)過程中大鼠死亡情況，70只大鼠進(jìn)行造模，注射STZ后72小時(shí)之內(nèi)，造模過程中死亡2只，血糖未達(dá)標(biāo)1只，原因可能與大鼠個(gè)體差異和操作有關(guān)，予以剔除。給藥過程中中藥組死亡1只、西藥組死亡2只，模型組死亡4只?？赡芎凸辔阜绞讲划?dāng)或血糖過高有關(guān)。4只血糖恢復(fù)不符合條件被剔除。正常組15只，中藥+

6、西藥組15只，中藥組14只，西藥組14只，模型組13只，共71只納入實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。
　　2比較各組大鼠體重、肥大指數(shù)（腎重/體重）
　　與正常組相比，各組大鼠的體重明顯減少(P＜0.05);模型組及各治療組之間體重?zé)o差異(P＞0.05);右腎重各組之間無顯著性差異(P＞0.05);模型、各治療組肥大指數(shù)明顯大于正常組(P＜0.05），模型與各治療組無差異(P＞0.05）。
　　3比較各組大鼠24小時(shí)尿蛋白定量
　

7、　于正常組相比，模型組及各治療組24h尿蛋白定量明顯增加(P＜0.05);與模型組相比，各治療組明顯下降(P＜0.05）;中藥+西藥組低于西藥組、中藥組(P＜0.05）;中藥組、西藥組無差別。(P＞0.05）。
　　4比較各組大鼠糖化血紅蛋白
　　與正常組相比，模型組及各治療組糖化血紅蛋白(HbAc1)明顯升高(P＜0.05);中藥+西藥組、中藥組低于模型、西藥組(P＜0.05）;中藥+西藥組與中藥組無差別(P＞0.05）;

8、模型組、西藥組無差別(P＞0.05）。
　　5比較各組大鼠血脂
　　與正常組相比，模型組和各治療組大鼠膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平明顯增高(P＜0.05），與模型組相比，各治療組膽固醇和甘油三酯水平顯著下降(P＜0.05);各治療組之間相比，中藥+西藥組膽固醇和甘油三酯水平均低于中藥組和西藥組(P＜0.05);西藥組、中藥組之間沒有明顯差異（P＞0.05）。
　　6比較各組大鼠腎功能
　　正常組、模型組、

9、各治療組肌酐、尿素氮變化無差別（P＞0.05）。
　　7比較各組大鼠血清蛋白
　　與正常組相比，模型組及各治療組血清總蛋白（TP）、白蛋白(ALB)明顯降低(P＜0.05）;與模型組相比，各治療組明顯升高(P＜0.05);各治療組之間相比，中藥+西藥組高于西藥組、中藥組(P＜0.05）;中藥組、西藥組無差別(P＞0.05)。
　　8比較各組大鼠腎臟病理形態(tài)學(xué)變化
　　8.1光鏡觀察
　　光鏡:正常組腎臟腎小

10、球結(jié)構(gòu)、大小正常，腎小球結(jié)構(gòu)完整清晰，未見明顯肥大，腎小球毛細(xì)血管基底膜正常無增厚，系膜及其基質(zhì)無明顯改變。模型組腎臟腎小球明顯肥大，基底膜增厚，系膜細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增多，系膜區(qū)顯著增寬。各治療組間比較，中藥+西藥組病理表現(xiàn)略輕于中藥組和西藥組，中藥組和西藥組之間無明顯區(qū)別。
　　8.2電鏡觀察
　　電鏡:正常組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)清晰正常，腎小球毛細(xì)血管基底膜結(jié)構(gòu)均勻無增厚，足細(xì)胞足突排列整齊，未見融合及缺失;模型組大鼠可見腎

11、小球基底膜顯著增厚，厚薄不均勻，外突呈丘狀，足突廣泛融合，血管內(nèi)皮細(xì)胞高度增生。各治療組均有不同程度的病理改變。
　　9 TIMP-1、MMP-9免疫組化觀察結(jié)果
　　正常組可見MMP-9陽性染色的明顯表達(dá);與正常組相比，模型組和治療組大鼠腎小球中MMP-9表達(dá)量明顯減弱(P＜0.05);與模型組相比，各治療組MMP-9的表達(dá)量明顯增強(qiáng)(P＜0.05);治療各組間比較，中藥+西藥組MMP-9的表達(dá)量多于中藥組和西藥組(P＜0

12、.05)，中藥組和西藥組無顯著差異(P＞0.05）。
　　正常組未見TIMP-1陽性染色的明顯表達(dá)，或者少量表達(dá);與正常組相比，模型組和治療組大鼠腎小球中TIMP-1表達(dá)量明顯增加(P＜0.05);與模型組相比，各治療組TIMP-1的表達(dá)量明顯減弱(P＜0.05);各治療組間比較，中藥+西藥組TIMP-1的表達(dá)量少于中藥組和西藥組(P＜0.05)，中藥組和西藥組無顯著差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1泄?jié)峤舛尽?/p>