泄?jié)峤舛?、活血通絡(luò)方對(duì)糖尿病腎病大鼠的保護(hù)作用及對(duì)腎組織Podocin mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)研究是以高糖高脂飼料聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(STZ)的方法來(lái)建立糖尿病腎病(DN)大鼠模型，單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用泄?jié)峤舛?、活血通絡(luò)方和厄貝沙坦對(duì)其進(jìn)行干預(yù)治療，通過(guò)觀察模型大鼠的各項(xiàng)生化指標(biāo)以及腎組織中Podocin mRNA的表達(dá)，探討Podocin與DN的關(guān)系以及泄?jié)峤舛尽⒒钛ńj(luò)方對(duì)DN大鼠的藥物干預(yù)作用和可能機(jī)制，為臨床實(shí)踐提供理論依據(jù)。
　　方法:選用85只SD大鼠，均為清潔級(jí)健康雄性，適應(yīng)性以普通飼料喂養(yǎng)一周，測(cè)尿

2、蛋白和尿糖均陰性，隨后隨機(jī)選取出15只為正常組(NG)給予普通飼料喂養(yǎng)，其余70只給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，12周后給予腹腔注射STZ35mg·kg-1，NG給予腹腔注射相應(yīng)體積的枸櫞酸緩沖液。72h后尾靜脈取血后測(cè)空腹血糖，血糖≥16.7mmol·L-1為糖尿病造模成功。造模過(guò)程中死亡2只，1只大鼠血糖不達(dá)標(biāo)而予以剔除。
　　將造模成功的大鼠按體重隨機(jī)分成四組:模型組(MG)17只、中藥組(ZYG)17只、西藥組(XYG)17只、加

3、藥組(JYG)16只。成模后給予藥物干預(yù)，各治療組分別給予4ml/d的相應(yīng)藥物溶液灌胃，正常組和模型組予相應(yīng)的生理鹽水灌胃，均每日1次，共計(jì)16周。在給藥后的第4周、第8周、第12周末分別取大鼠尾靜脈監(jiān)測(cè)血糖，留24小時(shí)尿液監(jiān)測(cè)尿蛋白。于治療16周末，禁食不禁水12h，在代謝籠里留取各組大鼠24小時(shí)尿液測(cè)定24小時(shí)尿蛋白定量，稱大鼠體重，并使用10％水合氯醛使大鼠麻醉，腹主動(dòng)脈取血，檢測(cè)大鼠血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、甘油三酯

4、(TG)、總膽固醇(TC)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)等生化指標(biāo);摘取右腎并稱其重量，并計(jì)算肥大指數(shù);留取腎臟組織分別在光鏡、電鏡下觀察大鼠腎組織的病理變化，采取免疫組化及Real-time PCR法檢測(cè)各組大鼠腎組織中足細(xì)胞podocin蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1實(shí)驗(yàn)大鼠一般情況的比較
　　正常組大鼠飲食精神狀態(tài)良好，反應(yīng)靈敏，肌肉豐滿，毛發(fā)有光澤，飲食、尿量均正常。造模組大鼠均出現(xiàn)典型的多飲、多食

5、、多尿、身體消瘦的“三多一少”癥狀，并隨時(shí)間推移部分大鼠出現(xiàn)精神萎靡、半身不遂、白內(nèi)障、尾部潰爛等并發(fā)癥，其中模型組的癥狀表現(xiàn)尤為突出;在給藥干預(yù)治療的過(guò)程中，各治療組大鼠上述癥狀較模型組均有所緩解。
　　2各組間大鼠體重，右腎重，肥大指數(shù)（肥大指數(shù)=右腎重/體重）的比較造模組比正常組大鼠體重均減輕(P＜0.05);模型組和各治療組組間相比無(wú)差別(P＞0.05)。大鼠右腎重各組間比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)。模型組、各治療組與正

6、常組比較，其肥大指數(shù)均升高(P＜0.05);模型組和各治療組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3各組大鼠糖化血紅蛋白(HbA1c)的比較
　　各治療組、模型組比正常組大鼠HbA1c均升高(P＜0.05);西藥組、模型組比加藥組、中藥組HbA1c均升高(P＜0.05);中藥組與加藥組比較無(wú)明顯差別(P＞0.05);模型組與西藥組比較無(wú)明顯差別(P＞0.05)。
　　4各組大鼠24小時(shí)尿蛋白定量(24hUTP)的比較

7、
　　各治療組和模型組比正常組大鼠24hUTP均升高(P＜0.05）;各治療組比模型組大鼠24hUTP均下降(P＜0.05）;加藥組比中藥組、西藥組大鼠24hUTP下降(P＜0.05）;中藥組、西藥組兩組間比較無(wú)明顯差別(P＞0.05)。
　　5各組大鼠血清TP、ALB、TC、TG的比較
　　各治療組、模型組比正常組TP、ALB均明顯降低(P＜0.05)，而TG、TC明顯升高(P＜0.05);各治療組比模型組TP、AL

8、B明顯升高(P＜0.05)，而TG、TC明顯降低(P＜0.05);中藥組、西藥組比加藥組TP、ALB均降低(P＜0.05)，而TG、TC升高(P＜0.05);中藥組、西藥組兩組間比較，TP、ALB、TG、TC均無(wú)明顯差別(P＞0.05)。
　　6各組大鼠Scr、BUN的比較
　　各組大鼠Scr、BUN比較均無(wú)明顯差別(P＞0.05)。
　　7大鼠腎臟組織病理形態(tài)的觀察
　　7.1在光鏡下觀察顯示
　　正常組

9、大鼠可見(jiàn)大小正常、結(jié)構(gòu)清晰完整的腎小球，未觀察到肥大的腎小球及毛細(xì)血管基底膜增厚，系膜基質(zhì)未見(jiàn)明顯改變;模型組大鼠可見(jiàn)腎小球體積增大，腎小球毛細(xì)血管基底膜明顯增厚，系膜區(qū)顯著增寬;各治療組與正常組比較，腎小球均有不同程度的病變，但其程度較模型組輕。
　　7.2在電鏡下觀察顯示
　　正常組大鼠可見(jiàn)腎組織結(jié)構(gòu)正常，腎小球的基底膜均勻無(wú)增厚，系膜區(qū)未見(jiàn)病理改變，足突排列整齊、無(wú)融合;模型組大鼠腎小球病變明顯，可見(jiàn)毛細(xì)血管基底膜顯著

10、增厚，系膜區(qū)增寬，足突裂孔膜增寬、大片融合;各治療組大鼠均有不同程度的病理改變，加藥組表現(xiàn)較不明顯。
　　7.3以免疫組化染色法檢測(cè)腎組織Podocin的表達(dá)
　　在正常組和各治療組中均有Podocin的表達(dá)，正常組表達(dá)最強(qiáng)，而模型組表達(dá)不明顯。與正常組比較，造模組大鼠的Podocin表達(dá)顯著減少(P＜0.05);與模型組比較，各治療組大鼠的Podocin表達(dá)較強(qiáng)(P＜0.05）;各治療組間比較，加藥組Podocin表達(dá)最強(qiáng)

11、(P＜0.05）;中藥組和西藥組均有Podocin的表達(dá)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　7.4以Real-time PCR方法檢測(cè)腎組織中Podocin mRNA的表達(dá)情況
　　與正常組比較，造模組大鼠腎組織中Podocin mRNA的表達(dá)減弱(P＜0.05);與模型組比較，各治療組大鼠腎組織中Podocin mRNA的表達(dá)均上調(diào)(P＜0.05）;與加藥組比較，中藥組和西藥組大鼠腎組織Podocin mRNA的表達(dá)下

12、調(diào)（P＜0.05）;中藥組與西藥組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1泄?jié)峤舛?、活血通絡(luò)方可以改善DN大鼠的一般情況，降低24小時(shí)尿蛋白定量，調(diào)節(jié)糖代謝和脂代謝，保護(hù)腎功能。
　　2泄?jié)峤舛?、活血通絡(luò)方抑制基底膜增厚、系膜基質(zhì)增生、足突融合，改善糖尿病腎病大鼠腎組織的病理?yè)p害，延緩DN的進(jìn)展。
　　3泄?jié)峤舛?、活血通絡(luò)方可以上調(diào)DN大鼠腎組織中Podocin mRNA的表達(dá)，從而減少蛋白尿的