化瘀中藥與通絡中藥對糖尿病腎病大鼠的干預作用及對腎組織ACE2的影響.pdf

1、目的：鑒于化瘀通絡方治療糖尿病腎病臨床療效確切，且前期實驗證實其對糖尿病腎病 Sprague-Dauley大鼠腎組織 ACE2—Ang-(1-7)—Mas通路具有活化作用，本實驗將化瘀通絡方拆解為化瘀中藥與通絡中藥對動物模型進行干預治療，通過通過觀察大鼠的一般情況、24小時尿蛋白定量、血生化指標、血凝指標、腎臟病理及腎組織ACE2的表達水平，對比化瘀中藥與通絡中藥對糖尿病腎臟的保護作用及其可能的機制，為臨床應用提供實驗基礎及理論依據(jù)。<

2、br>　　方法：選用清潔級健康雄性SD大鼠60只，體重60g-80g。普通飼料適應性喂養(yǎng)1周后，測定隨機血糖、24小時尿蛋白定量均為陰性者用于本實驗，按體重隨機選取正常組（C組）10只，造模大鼠50只，正常組繼續(xù)給予普通飼料喂養(yǎng)，造模組給予高脂飼料喂養(yǎng)。4周后，所有大鼠禁食不禁水12小時以上，造模組大鼠按35mg/kg一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）溶液，正常組大鼠給予相應體積的枸櫞酸緩沖液腹腔注射。72

3、小時后測隨機血糖≥16.7mmol/L者則為造模成功。造模成功大鼠共45只，隨機分為模型組（M組）12只、厄貝沙坦組（I組）11只、通絡組（T組）11只、化瘀組（H組）11只。造模成功后，各治療組給予相應藥物灌胃，正常組及模型組予等體積純凈水灌胃，每日一次,連續(xù)給藥共16周。分別于給藥第2、4、8、16周末收集24小時尿液，檢測24小時尿蛋白含量，并于給藥16周末，尾靜脈取血測隨機血糖。大鼠禁食不禁水12小時，稱量體重，麻醉動物，腹主動

4、脈取血分離血清，用于檢測血液指標，留取腎組織進行光鏡、電鏡、免疫組化、反轉錄酶-聚合酶鏈反應（reverse transcription-polymerse chain reaction，RT-PCR）以及蛋白免疫印跡法（Western-blotting）檢測分析。
　　結果：⑴C組大鼠體重逐漸增加，精神狀態(tài)良好，眼睛有神，反應敏捷，活動自然，毛色光澤，肌肉豐滿，無畸形，飲水及飲食量正常，尿量正常，糞便呈麥粒狀。造模各組大鼠均于腹

5、腔注射STZ后出現(xiàn)明顯的多飲、多食、多尿癥狀，體重相對 C組大鼠減輕，精神萎靡，少動抱團，肌肉消瘦，毛色晦暗，甚至毛發(fā)脫落，卷曲拱背，骨骼突出，尾巴蒼白且尾部靜脈瘀紫明顯。上述癥狀M組大鼠最為嚴重。在給藥第16周時各治療組大鼠一般情況與M組比較均有不同程度的緩解。⑵不同時間點M組及各治療組的24小時尿蛋白定量均明顯高于C組；第16周末，與M組相比，各治療組24小時尿蛋白定量明顯降低（P＜0.05），各治療組組間比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.

6、05）。⑶與C組相比，M組和各治療組隨機血糖均顯著升高（P＜0.05）；M組與各治療組及各治療組組間比較不具有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。⑷M組及各治療組總膽固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白水平較 C組均明顯升高（P＜0.05）。與 M組相比較各治療組總膽固醇水平降低（P＜0.05），各治療組組間比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。與M組相比， T、H兩組甘油三酯及低密度脂蛋白水平均明顯降低（P＜0.05），I組無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；

7、T、H兩組比較甘油三酯及低密度脂蛋白均無顯著差異（P＞0.05）。⑸與C組相比較，M組及各治療組尿素氮、血肌酐均明顯升高（P＜0.05）；M組與各治療組以及各治療組組間比較尿素氮無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；與M組比較，各治療組血肌酐明顯降低（P＜0.05），各治療組組間比較無顯著差異（P＞0.05）。⑹與C組相比，M組和各治療組血漿纖維蛋白原明顯升高（P＜0.05）；與M組比較，I組無顯著差異（P＞0.05），T、H組明顯降低，T、H

8、組間比較無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。⑺C組大鼠腎臟結構正常清晰；M組大鼠腎小球肥大，腎小囊腔裂隙樣改變，甚至存在球囊粘連，基底膜明顯增厚，系膜基質增多；與M組相比，各治療組病理改變均有所減輕。⑻C組大鼠腎組織結構正常清晰；M組大鼠腎小球毛細血管基底膜均質樣增厚，部分足突融合，系膜基質增多；與 M組相比，各治療組大鼠病理改變程度均有減輕。⑼與C組比較，M、I、T、H組第16周末腎皮質ACE2 mRNA的表達降低（P＜0.05）；與 M組

9、比較，I、T、H組表達升高（P＜0.05）；各治療組組間比較無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。⑽與C組相比，M、I、T、H組ACE2蛋白表達量減少（P＜0.05）；與M組相比，各治療組ACE2蛋白表達量增加（P＜0.05）；各治療組間比較，無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　結論：①結合大鼠隨機血糖、24小時尿蛋白定量、光鏡、電鏡等變化證明DN模型制備成功；根據(jù)血脂、血漿纖維蛋白原結果，證實DN大鼠存在高凝高黏狀態(tài)，符合中醫(yī)瘀血阻絡證

10、。②化瘀中藥、通絡中藥及厄貝沙坦可以改善DN大鼠一般情況，減緩蛋白尿的增加，維持腎功能，減輕DN病理損害，對DN大鼠具有腎臟保護作用。③根據(jù)血脂及血漿纖維蛋白原結果比較，化瘀中藥、通絡中藥能夠調節(jié)DN大鼠脂質代謝，改善其高凝狀態(tài)，此方面作用優(yōu)于厄貝沙坦。④DN大鼠腎皮質ACE2表達量降低，化瘀中藥、通絡中藥可上調ACE2表達量，提示化瘀中藥及通絡中藥延緩 DN進展的靶點之一為ACE2，其作用機制可能與阻斷RAS有關。⑤化瘀中藥與通絡中藥