宣通三焦、活血通絡(luò)方對膜性腎病大鼠腎臟的保護(hù)作用及對腎組織中CD2AP和Podocin的影響.pdf

1、目的：膜性腎?。∕N）是以腎小球臟層上皮細(xì)胞下免疫復(fù)合物彌漫性沉積、腎小球基底膜增厚伴“釘突”形成為病理學(xué)特征的腎小球疾病，其中病因未明者稱為特發(fā)性膜性腎病（IMN），約占MN的2/3。MN臨床主要表現(xiàn)為大量蛋白尿。本研究運(yùn)用尾靜脈注射陽離子化牛血清白蛋白（C-BSA）的方法，建立MN大鼠模型，并應(yīng)用宣通三焦、活血通絡(luò)方進(jìn)行干預(yù)治療，通過觀察大鼠的一般情況、24小時(shí)尿蛋白定量（24hUTP）、血清總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血清總

2、膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）等生化指標(biāo)以及腎組織中CD2AP和Podocin的表達(dá)，探討宣通三焦、活血通絡(luò)方對MN大鼠腎臟的保護(hù)作用及對腎組織中CD2AP和Podocin的影響，從而為防治MN提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　方法：選用清潔級健康雄性SD大鼠40只，體重160±20g，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后測其尿蛋白均為陰性，采用完全隨機(jī)法選取10只大鼠作為正常組（C組），30只大鼠為造模組。

3、造模組大鼠預(yù)免疫一周后，開始正式免疫，隔日一次進(jìn)行尾靜脈注射C-BSA，連續(xù)四周，建立MN大鼠模型，C組大鼠尾靜脈注射等量生理鹽水。造模結(jié)束后留取造模組大鼠24小時(shí)尿液測定24hUTP，確定模型復(fù)制成功后，按體重隨機(jī)將其分為模型組（M組）、中藥組（Z組）和雷公藤多苷加醋酸潑尼松組（L組）。Z組和L組分別給予相應(yīng)藥物進(jìn)行灌胃，C組和M組均以等量的生理鹽水灌胃，各組連續(xù)給藥四周。給藥結(jié)束后，留取各組大鼠24小時(shí)尿液測定24hUTP，麻醉狀態(tài)

4、下股動(dòng)脈取血測定TP、ALB、TC、TG、BUN、Scr等生化指標(biāo)，留取新鮮腎臟組織，應(yīng)用免疫熒光、光鏡、電鏡觀察大鼠腎組織的病理變化，免疫組化、Western-blot和Real-time PCR檢測大鼠腎組織中CD2AP和Podocin蛋白及mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠的一般情況:C組大鼠精神良好，活動(dòng)正常，體毛有光澤、無脫落，進(jìn)食、飲水正常，二便正常。各造模組大鼠出現(xiàn)不同程度的精神萎靡，抱團(tuán)少動(dòng)，體毛欠

5、光澤、有脫落，進(jìn)食減少，部分大鼠出現(xiàn)陰囊水腫。在造模過程中，造模組大鼠死亡三只，分析大鼠死亡原因可能是前期尾靜脈注射的C-BSA溶液純度不夠，經(jīng)改進(jìn)過濾方法，大鼠未再出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。給藥結(jié)束后， Z組和L組大鼠一般情況較M組大鼠有所好轉(zhuǎn)，M組大鼠一般情況未見明顯變化。
　　2.24hUTP:給藥結(jié)束后，各造模組24hUTP均較C組明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z組和L組24hUTP均較M組明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z組與L組24hUTP比較

6、無明顯差別，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.各組大鼠血液指標(biāo)的檢測結(jié)果
　?。?）TP、ALB：給藥結(jié)束后，各造模組TP、ALB均較C組明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Z組和L組TP、ALB均較M組明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Z組TP、ALB較L組TP、ALB明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?。?）TC、TG：給藥結(jié)束后，各造模組TC、TG均較C組明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Z組和L組TC、TG均較M組明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Z組TC、TG較L組

7、TC、TG明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　（3）BUN、Scr：給藥結(jié)束后，各組BUN、Scr無明顯變化，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.免疫熒光:C組大鼠腎小球上無明顯免疫復(fù)合物沉積；M組大鼠可見IgG沿腎小球毛細(xì)血管袢及系膜區(qū)彌漫性沉積；Z組和L組可見IgG沿腎小球毛細(xì)血管袢及系膜區(qū)少量沉積。
　　5.光鏡:C組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)無明顯改變；M組大鼠腎小球毛細(xì)血管基底膜彌漫性增厚，“釘突”形成，系膜基質(zhì)增多；Z組和L組大鼠腎小球

8、毛細(xì)血管基底膜輕度增厚，少量“釘突”形成，系膜基質(zhì)增多不明顯。
　　6.電鏡:C組大鼠腎小球足細(xì)胞結(jié)構(gòu)無明顯變化；M組大鼠腎小球基底膜增厚，上皮下可見大量電子致密物沉積，足突彌漫融合或消失，有“釘突”形成；Z組和L組大鼠腎小球基底膜輕度增厚，上皮下有少量電子致密物沉積，足突部分融合。
　　7.免疫組織化學(xué)法:CD2AP在C組大鼠腎小球上大量分布，少量表達(dá)在腎小管和集合管上，呈棕黃色染色；在M組大鼠腎小球上表達(dá)明顯減少；與M組

9、相比， CD2AP在Z組和L組大鼠腎小球上的表達(dá)明顯增多。Podocin在C組大鼠腎小球上表達(dá)，在腎小管和間質(zhì)上無明顯表達(dá)，沿腎小球基底膜呈線性分布，呈棕黃色染色；在M組大鼠腎小球上表達(dá)明顯減弱；與M組相比，Podocin在Z組和L組大鼠腎小球上的表達(dá)明顯增強(qiáng)。
　　8.Western blot:與C組相比，各造模組大鼠腎組織中CD2AP的表達(dá)均明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與M組相比，Z組和L組大鼠腎組織中CD2AP的表達(dá)明顯增加，有

10、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Z組大鼠腎組織中CD2AP的表達(dá)和L組大鼠腎組織中CD2AP的表達(dá)相比無明顯差別，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與C組相比，各造模組大鼠腎組織中Podocin的表達(dá)均明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與M組相比，Z組和L組大鼠腎組織中Podocin的表達(dá)明顯增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Z組大鼠腎組織中Podocin的表達(dá)和L組大鼠腎組織中Podocin的表達(dá)相比無明顯差別，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　9.Real-time PCR:與C組相比，各造模組大鼠腎組

11、織中CD2AP mRNA的表達(dá)均明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與M組相比，Z組和L組大鼠腎組織中CD2AP mRNA的表達(dá)明顯增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Z組大鼠腎組織中CD2AP mRNA的表達(dá)和L組大鼠腎組織中CD2AP mRNA的表達(dá)相比無明顯差別，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與C組相比，各造模組大鼠腎組織中Podocin mRNA的表達(dá)均明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與M組相比，Z組和L組大鼠腎組織中Podocin mRNA的表達(dá)明顯增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Z組大鼠

12、腎組織中Podocin mRNA的表達(dá)和L組大鼠腎組織中Podocin mRNA的表達(dá)相比無明顯差別，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.宣通三焦、活血通絡(luò)方能夠有效地改善MN大鼠的一般情況，顯著降低MN大鼠24hUTP水平，同時(shí)還可以調(diào)節(jié)脂代謝，升高血漿蛋白。
　　2.宣通三焦、活血通絡(luò)方能夠有效地抑制或減少M(fèi)N大鼠腎小球基底膜免疫復(fù)合物的沉積，減輕MN大鼠腎組織病理學(xué)改變，延緩腎損害。
　　3.宣通三焦、活血