舒洛地特對膜性腎病大鼠腎臟中podocin、CD2AP、nephrin表達的影響.pdf

1、目的:膜性腎病(membranons nephropathy，MN)是成人性腎病綜合征的常見病因，其病理特點為局限于腎小球上皮下免疫復合物沉積。臨床表現(xiàn)為大量蛋白尿。本研究通過注射陽離子化牛血清白蛋白的方法，建立SD大鼠膜性腎病模型，并應用舒洛地特進行干預，觀察大鼠24小時尿蛋白定量以及膜性腎病腎小球podocin、CD2AP、nephrin表達的變化，從而探討舒洛地特對膜性腎病干預的新靶點，為人類防治膜性腎病提供新的理論依據(jù)。

2、　　方法:選擇8周齡清潔級健康雄性SD大鼠40只，體重160±20g，普通飼料適應性飼養(yǎng)1周后，測24小時尿蛋白均為正常，采用隨機法將其分為4組，正常對照組、模型組、高劑量舒洛地特組、低劑量舒洛地特組，每組10只。除正常對照組外，其余組應用自備陽離子化牛血清白蛋白(C-BSA)預免疫1周后，隔日尾靜脈注射C-BSA復制膜性腎病大鼠模型。正常對照組尾靜脈注射等體積生理鹽水，連續(xù)4周后代謝籠中留取各組大鼠24小時尿液，檢測24小時尿蛋白定量

3、。造模成功后高劑量舒洛地特組給予舒洛地特20mg/kg灌胃，低劑量舒洛地特組給予舒洛地特10mg/kg灌胃。模型組和正常對照組灌服等體積生理鹽水，各組大鼠自由進食、飲水。連續(xù)給藥4周后，再次留取各組大鼠的24小時尿液，檢測24小時尿蛋白定量，隨后將大鼠處死，留取腎組織，應用光鏡、電鏡觀察大鼠腎小球病變情況，采用免疫組織化學方法檢測podocin、CD2AP、nephrin的表達情況，結果應用圖像分析系統(tǒng)IPP(Image-Pro Plu

4、s)進行半定量分析。
　　結果:
　　1.實驗大鼠的一般情況
　　正常對照組的大鼠飲食、尿量均正常，反應靈敏，眼睛有神，肌肉豐滿。其余三組大鼠經(jīng)尾靜脈注射C-BSA后，出現(xiàn)飲食減少、精神萎靡、毛發(fā)脫落、少動抱團，大部分大鼠出現(xiàn)陰囊水腫。實驗最后一周時，與正常對照組相比，造模各組大鼠體形較小，毛發(fā)脫落（腹部為重）。
　　2.24小時尿蛋白定量
　　24小時尿蛋白定量，在連續(xù)尾靜脈注射C-BSA4周后，模型組、

5、高劑量舒洛地特組、低劑量舒洛地特組與正常對照組比較均顯著升高(P均＜0.05)，連續(xù)舒洛地特灌胃4周后，高劑量舒洛地特組與低劑量舒洛地特組24小時尿蛋白較前均有所降低，與模型組相比有顯著性差異(P均＜0.05)，與低劑量舒洛地特組相比，高劑量舒洛地特組24小時尿蛋白降低更明顯(P＜0.05)。
　　3.腎組織病理形態(tài)學觀察
　　光鏡:正常對照組大鼠腎小球形態(tài)基本正常，毛細血管袢開放良好，無固有細胞增多，無基底膜增厚;模型組大

6、鼠腎小球固有細胞增多，基底膜明顯增厚;高劑量舒洛地特組和低劑量舒洛地特組大鼠的腎小球固有細胞輕度增多，基底膜增厚較模型組減輕。
　　電鏡:正常對照組大鼠的足細胞結構清晰，足突排列整齊;模型組大鼠的腎小球基底膜彌漫增厚，上皮下電子致密物沉積，足細胞足突廣泛融合或消失;低劑量舒洛地特組大鼠腎小球基底膜不規(guī)則增厚，上皮下電子致密物沉積，足突部分融合;高劑量舒洛地特組大鼠基底膜輕度增厚，上皮下少量電子致密物沉積，足突部分融合。
　　

7、4.免疫組化結果
　　從免疫組化染色中可以觀察到podocin、CD2AP、nephrin三種蛋白表達于腎小球上皮下。該三種蛋白在正常對照組腎小球上均有大量表達，模型組、低劑量舒洛地特組及高劑量舒洛地特組腎小球上也均有表達，但較正常對照組表達降低，有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05)，模型組中podocin、CD2AP、nephrin的表達較低劑量舒洛地特組及高劑量舒洛地特組表達均降低，有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05)，低劑量舒洛地特組與

8、高劑量舒洛地特組相比，podocin、CD2AP、nephrin表達較低，具有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05）。
　　結論:
　　1.膜性腎病大鼠足細胞nephrin、podocin及CD2AP表達下降，并與足細胞足突融合程度及蛋白尿程度變化一致。提示nephrin、podocin及CD2AP可能參與膜性腎病腎小球足細胞損傷和蛋白尿產(chǎn)生。
　　2.舒洛地特可以降低膜性腎病大鼠24小時尿蛋白含量。
　　3.舒洛地特可以